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一、環(huán)境監(jiān)控對產(chǎn)品放行的意義是什么？ 通過以下兩個案例說明環(huán)境監(jiān)控的意義，案例也是頓昕老師在以往工作當中實際發(fā)生的。 案例1:我記得有一次就是在我去一個藥廠看，是生產(chǎn)無菌制劑的一個藥廠，我看到企業(yè)就是廠房的布局其實不是特別合理，是一些比較老的一個廠房。但是而且它的從比如廠房的設計，比如送風口，回風口的位置，還有看到很多的物料的交叉，我甚至看到正在往無菌區(qū)域傳一些東西，又一同時往外傳，同時在傳利用一個傳遞窗。還看到他們消毒劑配制的也非常的粗獷，不是很準確，包括他們人員在清潔廠房表面的時候流程都不是很好，在看到這些情況的時候我給他也指出，我說你們廠房其實在很多的問題，大家應該更好的進行培訓。但是企業(yè)的車間主任就跟我講說：頓老師說我們這個企業(yè)這方面可能有問題，但實際上都不是大問題，為什么？因為我們的環(huán)境監(jiān)控的結果都非常的好，甚至連我們的C級D級都是經(jīng)?；旧蠜]有微生物發(fā)現(xiàn)。其實談到這個也讓我想起一個問題，是不是環(huán)境監(jiān)控的這種結果看起來“好”很話，就能證明它的不管是布局也好，操作也好，消毒也好，都做得非常到位嗎？是不是能夠環(huán)境監(jiān)控來得到這樣的結論，就這個事是也跟大家共同探討。 從我的角度看，我倒認為不能這么看，其實這個環(huán)境監(jiān)控它只是一個工具，它是提供一些數(shù)據(jù)給我們，但是其實它建立在一些基礎上面，我也看到了第13號技術報告有一段話寫得非常的好：其實環(huán)境監(jiān)控結果它建立在良好的廠房的設計，規(guī)范的消毒的程序，人員應該經(jīng)過培訓等等，在這些條件下，環(huán)境監(jiān)控的這種結果才有意義。所以上面這個例子，我覺得他把環(huán)境監(jiān)控結果只要是好，他就認為所有做的其他方面都做得非常好，這樣我覺得是一個不合理的一種推論。 案例2:我在曾經(jīng)也在另外一個企業(yè)見到一種情況，那是一個無菌凍干粉針的一個車間，其實有一天他們發(fā)現(xiàn)他們的B加A的房間當中的一個B級區(qū)在墻壁的上取樣的時候，超過了內控標準（4個菌）。這個時候他們就開始啟動調查，做的還是比較完善的，他包括菌種鑒別在內的各種調查。調查的結果證明了其實他在B區(qū)比如在前面消毒的時候，也存在微生物。這個微生物判斷也是他們車間里常年發(fā)現(xiàn)的，在他們菌種車間的微生物庫當中是有的。后來QA也同意說你們調查結果這個原因也找到了，然后對產(chǎn)品實現(xiàn)沒有太大影響，但是在產(chǎn)品放行的時候，QA就提出來說，因為你們有一個環(huán)境監(jiān)控的結果超標，那產(chǎn)品是不能放行的。所以我也想跟大家探討這個問題，是不是我們就能拿這個環(huán)境監(jiān)控結果來判斷一個產(chǎn)品來否定一個產(chǎn)品不能出廠？ 通過以上2個案例，可以知道其實環(huán)境結果它更多的是一個促使我們企業(yè)去調查的原因，它不應該成為我們這個產(chǎn)品放行指標的一個外延，其實這個環(huán)境監(jiān)控它是起到預警機制，允許我們能提前去做一些糾正性措施，但是并不合適去把環(huán)境監(jiān)控看成是產(chǎn)品的放行的標準。就像比如說我們平時產(chǎn)品放行的時候有活性、濃度、含量，有關物質等，這個時候我們再加一個把環(huán)境監(jiān)控結果，是不合適的。 二、對壓縮氣體中微生物的檢測有什么要求？ 壓縮空氣其實在GMP中其實是有要求的，（第42條）如果是進入無菌區(qū)的生產(chǎn)用氣體，它需要進行除菌過濾。在指南當中也提到壓縮空氣，它其實有一個微生物負荷的要求。對于壓縮空氣的檢測考慮其使用用途，當壓縮空氣它是作為動力，不直接接觸藥品，那么就不需要檢測；但如果這個氣體直接接觸到藥品的話的要求就很高，那么從理論上講它應該至少達到一個A級空氣這么樣一個標準。對于壓縮空氣，需要建立管理的規(guī)程，規(guī)定取樣頻率、取樣的方法、在什么級別下用什么樣的方法，常見取樣方案如下： 收集采樣方法（1）：液體收集器(Chiron Italy ) 收集采樣方法（2）：47mm不銹鋼薄膜過濾器 (MacoPharma France) 收集采樣方法（3）：大氣壓力下采樣（通過泄壓） 三、無菌車間是否能只消毒，不清潔？ 或者兩者一次完成？什么消毒劑最適合無菌區(qū)使用清潔消毒可以二合一嗎？ 關于生產(chǎn)車間生產(chǎn)企業(yè)怎么進行消毒清潔的這么一個問題。那么我們現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)一種問題就是很多企業(yè)他只去做消毒，不去進行清潔，現(xiàn)在這種二合一不是不可以，但是你要一定要知道在你的消毒劑當中含有清潔劑的成分，如果你沒做清潔，清潔不徹底直接用消毒劑的話，那消毒劑它是接觸不到我們墻體或者說地面或者說實際的物體的，這樣的消毒效果是達不到我們追求的目標。 1.大消毒的方式可取嗎 另外一種趨勢就是我們現(xiàn)在很多的企業(yè)，我們看到都是比較重視這種大消毒，就是這種全面消毒，我看很多企業(yè)使用了甲醛熏蒸，VP、臭氧，其實我是不太推薦的，我就覺得這種大消毒的方式可以做，但是并不需要這種很密集的經(jīng)常性的，其實我們應該更重視的是日常的清潔消毒，對墻面、地面、設備表面這種擦拭的其實更加我們應該重視！ 2.消毒劑的選擇 沒有任何一種殺菌劑可以達到最理想的效果。對于生長中的細菌有效的殺菌劑可能無法殺滅孢子。而對于孢子有殺滅效果的殺菌劑或消毒劑往往會對設備產(chǎn)生腐蝕作用，例如酸化的漂白劑就會對不銹鋼產(chǎn)生腐蝕作用，所以，應該只在確實需要的原則下謹慎地使用此類殺菌劑或消毒劑。 四、對無菌注射劑車間發(fā)現(xiàn)的環(huán)境菌，如何鑒別更合理？ 當出現(xiàn)以下情況時，需要進行菌種鑒別： 1、 OOS 2、成品無菌檢查陽性 3、成品的微生物限度超標 4、驗證中的陽性 例如：培養(yǎng)基模擬灌裝驗證 中間產(chǎn)品微生物負荷超標 環(huán)境監(jiān)控 趨勢超出警戒線或行動限 “可疑微生物”的發(fā)現(xiàn) 水系統(tǒng)監(jiān)測超標 微生物應該鑒定到什么水平？ 應與具體使用情況相結合，例如：無菌關鍵區(qū)域，鑒定至種，甚至株；在非無菌區(qū)域，鑒定至屬即可，甚至只需革蘭氏染色大部分的微生物鑒定都是基于革蘭氏染色。 五、A/B級連續(xù)監(jiān)控的采樣量和報警時限應如何決定？ 首先說我們說無菌A級監(jiān)控時，采樣的頻率與采樣量究竟應該是多少？ 1、首先它應該是對應單個取樣點的，不是多點累積值。您總不會將所有點的粒子結果數(shù)值加到一起，除以所有點的取樣體積 2、 其次，它不是從監(jiān)控開始到監(jiān)控結束所有的多次累積的全程采樣體積。例如整個生產(chǎn)過程設備共采樣20個立方米等， 3、第三，所指的不是設備的單位時間采樣量，例如2.83升，28.3升，50升。 4、它不一定與法規(guī)中所采用的標準單位相同，例如在附錄1中，A級，0.5um的粒子的合格標準是：每立方米的0.5um的粒子，應小于等于3520個，這里選用了1立方米作為標準單位。換句話說，作為標準，可以公制，可以英制，3520/立方米可以換算成100個/立方英尺，那么采樣量必須就是1立方英尺了？這顯然不合情理。 5、還有一個旁證是：A級沉降菌的標準是1cuf/4小時，采樣量就必須4小時嗎？當然不一定。很多培養(yǎng)皿4小時就干掉了，不容易長菌了，這時，我們可以用兩個90mm的平皿，每個放置2小時，連續(xù)累積就行。甚至，如果生產(chǎn)過程是3小時，企業(yè)監(jiān)控3小時沉降菌就可，然后用結果除以3再乘以4，最后與4小時標準比較。所以說：法規(guī)中所采用的標準單位是每立方米，不是說采樣量就必須一個立方米。 我的結論是：所指的采樣量是用于評價結果的采用量。也就是說，在這個采樣量達到后的結果將被我們所審視，或用于分析，或引起警覺，再或采取行動。 有人說，“這有什么討論的，法規(guī)規(guī)定了無菌A級應采1立方米，我們必須按1立方米采樣?！苯ㄗh他/她仔細看看法規(guī)，在我國的2010版GMP，附錄一第九條第1項中明確規(guī)定，“為確認A級潔凈區(qū)的級別，每個采樣點的采樣量不得少于1立方米?！闭堊⒁膺@里的目的：為了確認級別……A級粒子監(jiān)控的目的，可能是用于確認級別，也可能是用于過程監(jiān)控。 當用于確認級別時，采樣時間應該長一些，采樣量應該大一些，這樣的結果才有代表性。所以，法規(guī)規(guī)定不能小于1立方米?！眲討B(tài)和靜態(tài)的采用量是一致的，我想大家對此沒有什么異議了吧。 所以，我認為，對于無菌生產(chǎn)過程的粒子監(jiān)控，采樣量不宜太大，法規(guī)沒有要求1立方米。如果采用28.3升的粒子采樣器，35分鐘的結果滯后嚴重，1立方米的采樣量進行結果判斷是不很合理。筆者見到部分企業(yè)雖然是每一分鐘都有數(shù)值顯示，但這一分鐘顯示的數(shù)值是基于前面60分鐘的計算平均值，（目的是追求1立方米進行取樣），這樣作，異常情況同樣被掩蓋。 雖然得到以上結論，我并不認為，采樣量越小越好。我們應從實際出發(fā)考慮。如果，安裝后粒子計數(shù)器受到干擾因素較多，穩(wěn)定性較差，可以適當延長采樣時間，加大采樣量。 六、浮游菌和沉降菌是否可以選一個項目來做？ 關于浮游菌和沉降菌是否選擇一個項目來，這也是很多人問我的一個問題，就是早比較早的時候大家問這個問題，現(xiàn)在可能大家基本上兩個都做了，兩個都做是對的，其實浮游菌和沉降菌所監(jiān)測對象是不同的，浮游更多是漂浮在空氣當中的，它其實包括那些有可能沉降的菌，但是沉降菌一般都是比較大的這種顆粒，然后微生物附著是比較大的顆粒，最后能沉降到下邊我們碟子上面。很多的這種菌或者說一些小顆粒，它在空氣當中它是懸浮的，它是沉降不下來的。我的結論是兩個都需要做的原因是什么？原因是從浮游菌這個角度說，它監(jiān)測的范圍更廣，它把漂浮在這空間當中的菌和沉降下來的菌都進行了監(jiān)測。但是浮游菌有一個最大的一個弱點，就是他在監(jiān)測的時候它不是全程監(jiān)測，它只是對一些在過程當中，比如每30分鐘他就取一次樣，它可能整個過程當中他不是全程取樣，而沉降菌是一個全程的取樣，所以它涵蓋的過程時間會比較長。所以兩個監(jiān)測指標各自有各自的優(yōu)勢，我認為這都是需要進行監(jiān)測的。 七、如何理解A級區(qū)微生物小于1的要求 下面一個問題是關于如何理解A級區(qū)的微生物小于一的問題，法規(guī)是這樣要求的：A級區(qū)的微生物需要小于1。很多同志來問我這個問題，就說為什么是小于1不是等于0？我覺得這個可以從兩個角度去理解，第一就是像微生物這樣檢測指標，它和化學指標不太一樣，一般我們只能說沒有檢出，很難說它就是零。另外一個小于1，其實它還是有一定平均值的概念。但這個平均值的概念有些特殊。舉個例子，A區(qū)可能有監(jiān)測有多個點，這些點之間是不可以平均的。比如說我們第一個點，這時候測出來是1第二點測試是0，第三個點測是0，我們不能把三者加起來，然后E除以1/3的0.3，就每個點是0.3，這樣做是不可以的。但是在一個點前后時間這樣一個過程當中是可以有平均這個概念的，但也不是所有的點的前后都是可以平均地在一些關鍵的點的話，我覺得比較負責任的企業(yè)，它也會規(guī)定，比如像罐裝針頭的一些接觸碟的話是不進行平均的。 關于沉降菌的四小時的含義，比如說小于1四個小時什么概念，并不是說一定要測四個小時，它只是作為四個小時作為一個單位進行可以進行比較。如果我的整個的無菌工藝過程在兩個小時結束的話，我沒有必要去對四個小時進行富有沉降菌檢測。 八、A、B級環(huán)境監(jiān)控培養(yǎng)皿，進出時，有沒有風險？ 1.就是關于環(huán)境用的這些培養(yǎng)皿，它的一個傳入傳出有什么風險，應該怎么去做？ 首先還是推薦大家使用就是一種預制碟，盡量不用就是我們企業(yè)自己澆灌的這樣的一個平皿?？梢赃@么講，一般的預制碟都是經(jīng)過輻照的，所以它是你可以想象它是一個最終滅菌產(chǎn)品。而我們企業(yè)自己澆的這種碟，因為它有無菌工藝過程在里面，所以其實風險是比較大的。再向車間里邊去傳遞的時候，向A級區(qū)傳遞的時候，一般需要多層包裝，通過脫包裝進入到比較嚴格的區(qū)域，這過程當中也伴隨著表面進行消毒。我建議在傳入到A級區(qū)的時候是一次性傳入。 2.關于無菌區(qū)的取樣點的問題，無菌區(qū)的取樣點到底應該怎么去設置？ 如果簡單的講，它應該是一個通過評估，通過衡量風險來決定的。那么這些取樣點并不是說通過區(qū)域我平均來進行劃分的。這和我們定潔凈級別的時候的取樣點是不同的。比如說在進行定級的時候，一般我們要依據(jù)iso的14644，這里邊就根據(jù)面積，然后現(xiàn)在的直接是有多少個點可以去查那個表。這里邊它其實是一個平均去布點的這樣的一個概念。但是在進行環(huán)境監(jiān)控的時候，在我們進行微生物監(jiān)測的時候，這個時候的目的是不同的，應該根據(jù)風險來決定，哪些地方有產(chǎn)品暴露，哪些是地方產(chǎn)品，暴露的時間很長，哪些地方有人員操作，根據(jù)這些風險來決定，最后我把環(huán)境監(jiān)控點放在哪里？例如我們比如放在灌裝的點，比如說放在里平盤上面，比如放在凍干機的門口，這些其實都是通過風險評估下來的。 3.警戒限度和糾偏限度的設置常用的方法有： 平均值與標準偏差 是用于環(huán)境監(jiān)控數(shù)據(jù)分析的傳統(tǒng)方法 基于假設：樣本符合正態(tài)分布 警戒限度：平均值 +2 * 標準偏差 糾偏限度：平均值 +3 * 標準偏差 百分比 概率圖 質量控制圖 當使用平均值與標準偏差時要注意以下情況： 警戒限度= 0.71 + 2 * 0.84 = 2.40 糾偏限度= 0.71+ 3 * 0.84 = 3.20 沒有任何結果超糾偏限度 實際上從結果從0到1，已經(jīng)表現(xiàn)出了對正常情況的偏離
九、討 論 1. 在做警戒限糾偏限時用到平均值+2標差或+3標差或更高如到+6標差，這里有什么標準嗎？ 回答：沒有，企業(yè)根據(jù)情況自行制定，目的是能觸發(fā)警示，提前發(fā)現(xiàn)問題。減少更多損失 2. 產(chǎn)品無菌灌裝時限5~6個小時，沉降菌動態(tài)監(jiān)測平皿，到4個小時需要更換，還是不用更換？ 回答：必須更換，一般最長不超過4小時，4小時也需要驗證。 3. 沉降菌xx/4h是標準單位，大于或小于4h，不用折算，如何判斷最后結論？ 回答：需要折算，除以小時數(shù)再乘以4，當然，企業(yè)可以在一些關鍵點采取更加嚴格的標準，例如每個皿都不得檢出。 文章來源：知藥學社 |
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