基于ERA技術(shù)的 CRISPR/Cas12a.而在近日，國內(nèi)眾多研究所專家在歐洲食品科學(xué)與技術(shù)聯(lián)合會(huì)（EFFoST）官方科學(xué)期刊刊登了快速鑒定啤酒腐敗細(xì)菌課題研究中取得突破性成果，通過由先達(dá)基因研發(fā)的酶促恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（ERA技術(shù)），實(shí)現(xiàn)了對(duì)腐敗菌現(xiàn)場的準(zhǔn)確快速核酸檢測。在本研究中，專家建立了一種快速、特異且高度便攜的基于 CRISPR/Cas12a 的關(guān)鍵啤酒腐敗細(xì)菌掃描方法，稱為 CRISPR-Beer Scan。

我國核酸檢測取得技術(shù)突破，可實(shí)現(xiàn)10分鐘全程現(xiàn)場完成。這是來自于中國的一家創(chuàng)新企業(yè)，依托自主開發(fā)的新一代核酸檢測技術(shù)（New ERA）,配套微型熒光檢測儀（基因鏡，GENEYE?），打造出一款“10分鐘一體化核酸檢測解決方案”，無需繁雜樣本處理，操作簡單，未來有望廣泛用于醫(yī)院床旁、基層診所、野外、學(xué)校、機(jī)場、家庭等檢測場景，甚至可應(yīng)用于腫瘤、老年癡呆等早期篩查領(lǐng)域。新一代核酸檢測技術(shù)，讓病原檢測j進(jìn)入10分鐘時(shí)代。

聽說你的細(xì)胞被污染了？細(xì)胞培養(yǎng)中的常見污染主要包括：細(xì)菌、霉菌、支原體、黑膠蟲、病毒和交叉污染等，每一種污染都有各自的特點(diǎn)。如下圖所示：左：懸浮細(xì)胞污染后，可見懸浮細(xì)胞個(gè)體遠(yuǎn)大于桿狀細(xì)菌，而細(xì)菌呈黑色顆粒狀并會(huì)有較快的運(yùn)動(dòng)速度；細(xì)菌污染的細(xì)胞（左懸浮細(xì)胞，右貼壁細(xì)胞）另外添加西司他丁鈉和亞胺培南（泰能）處理細(xì)胞，適用于培養(yǎng)用具被打翻、使用了污染的培養(yǎng)液或要培養(yǎng)污染的組織或者凍存細(xì)胞的污染情況[1]。

酶促恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（ERA）在食品安全檢測領(lǐng)域的應(yīng)用。實(shí)時(shí)熒光型核酸擴(kuò)增ERA，是 ERA 基礎(chǔ)反應(yīng)體系與熒光探針結(jié)合起來的一種聯(lián)用技術(shù)。ERA-ELISA 技術(shù)是在 ERA 技術(shù)的基礎(chǔ)上結(jié)合 ELISA 技術(shù)發(fā)展起來的用于檢測核酸擴(kuò)增產(chǎn)物的新型分析檢測手段，綜合了 ERA、ELISA 兩種技術(shù)的特點(diǎn)，在特異性、靈敏性等方面表現(xiàn)出優(yōu)異的特點(diǎn)、而且操作過程簡單，結(jié)果不需要電泳檢測和 ERA 產(chǎn)物純化，較短時(shí)間內(nèi)可以完成整個(gè)檢測過程。

銅綠假單胞菌簡介1 基本簡介。青霉素對(duì)此菌無效，但慶大霉素和多粘菌素B、E，氨基甙類、第三和第四代頭孢菌素（頭孢哌酮、頭孢曲松、頭孢匹羅、頭孢唑南等，后兩種為三線抗菌藥物，應(yīng)慎用）等抗生素作用較明顯，一些半合成的青霉素類抗生素，比如阿洛西林和哌拉西林對(duì)綠膿桿菌也有很強(qiáng)的抗菌作用，其有效率約為80%。②細(xì)菌改變抗菌藥物作用的靶位，如青霉素結(jié)合蛋白(PBPs)、DNA旋轉(zhuǎn)酶等結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，從而逃避抗菌藥物的抗菌作用。

CRISPR快速核酸檢測系統(tǒng)介紹。CRISPR-Cas12a快速核酸檢測系統(tǒng)。首先進(jìn)行RPA快速等溫?cái)U(kuò)增，擴(kuò)增過程只需要15min，并且在擴(kuò)增反應(yīng)管中，除了包括RPA擴(kuò)增的所有體系之外，也包括除Cas12a酶之外酶切的所有體系，他們是將Cas12a酶固定在擴(kuò)增反應(yīng)管壁上。整個(gè)檢測過程中RPA擴(kuò)增的反應(yīng)體系和Cas12a酶切的體系是混合在一起的，為了能讓Cas12a有效地切割RPA擴(kuò)增產(chǎn)物，作者通過大量實(shí)驗(yàn)摸索發(fā)現(xiàn)用NEB buffer 2.1有較好的酶切效果。

當(dāng)PCR反應(yīng)開始后,莖環(huán)結(jié)構(gòu)在變性高溫條件下打開,釋放熒光;在退火過程中,靶序列特異性探針則與模板雜交保持線性,不能與模板雜交的探針則復(fù)性為莖環(huán)結(jié)構(gòu)而熒光淬滅,通過檢測qPCR體系中退火時(shí)的熒光信號(hào)強(qiáng)度,便可以real-time PCR原理特異性檢測體系中的初始模板濃度。經(jīng)過PCR后,對(duì)每個(gè)微反應(yīng)孔的熒光信號(hào)進(jìn)行檢測,存在靶核酸模板的反應(yīng)孔會(huì)釋放熒光信號(hào),沒有靶模板的反應(yīng)孔就沒有熒光信號(hào),以此推算出原始溶液中待測核酸的濃度。

2015版中國藥典規(guī)定：“主細(xì)胞庫、工作細(xì)胞庫、病毒種子批、對(duì)照細(xì)胞以及臨床治療用細(xì)胞進(jìn)行支原體檢查時(shí)，應(yīng)同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)法和指示細(xì)胞培養(yǎng)法（DNA染色法）。病毒類疫苗的病毒收獲液、原液采用培養(yǎng)法檢査支原體，必要時(shí)，亦可采用指示細(xì)胞培養(yǎng)法篩選培養(yǎng)基。也可采用經(jīng)國家藥品檢定機(jī)構(gòu)認(rèn)可的其他方法。”為避免細(xì)胞再次受到“支原體”的污染，以后每隔1個(gè)月進(jìn)行支原體的常規(guī)檢測，以保證沒有新的支原體污染。

體外診斷試劑液體輔助試劑分類界定！2.7.1直接參與檢測反應(yīng)的單組分試劑，如：校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、對(duì)照品、免疫分析的第一抗體、生化產(chǎn)品中的反應(yīng)試劑、核酸分析的引物等，不屬于體外診斷試劑液體輔助試劑。2.7.3 關(guān)于通用試劑和專用試劑，當(dāng)某一液體輔助試劑適用于某一檢測系統(tǒng)一系列試劑盒的共同作用時(shí)，一般應(yīng)被視為通用試劑；當(dāng)液體輔助試劑同時(shí)具有通用試劑和專用試劑的功能時(shí)，建議按照專用試劑的類別管理。

Cell子刊：新冠病毒是如何劫持并摧毀人類肺部細(xì)胞的。研究人員檢查了SARS-CoV-2感染后1到24小時(shí)內(nèi)的肺泡細(xì)胞，以了解肺細(xì)胞立即發(fā)生了什么變化（在SARS-CoV-2感染后1、3和6小時(shí)）以及后來發(fā)生了什么變化（在感染后24小時(shí)）。論文的共同通訊作者 Darrell Kotton 教授表示：這些結(jié)果表明，與正常/未感染的肺細(xì)胞相比，SARS-CoV-2感染的肺細(xì)胞在數(shù)千種蛋白質(zhì)的豐度和磷酸化事件中顯示出巨大的變化。

分子診斷-獸醫(yī)體外診斷的趨勢和制高點(diǎn)。作為一種在獸醫(yī)診斷領(lǐng)域新興的檢測技術(shù)，PCR因其無可比擬的優(yōu)勢受到了越來越多的關(guān)注，也將會(huì)引領(lǐng)獸醫(yī)體外診斷技術(shù)發(fā)展的潮流。實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)（將熒光基團(tuán)加入到PCR反應(yīng)體系中，借助熒光信號(hào)，累積實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR的進(jìn)程）不僅具有傳統(tǒng)PCR的優(yōu)勢，還具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好、反應(yīng)速度快、定量準(zhǔn)確和自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，成為國際公認(rèn)的核酸分子定量的標(biāo)準(zhǔn)方法。

基因檢測的市場應(yīng)用有哪些？7、病原微生物檢測：應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)快速檢測病原微生物，對(duì)感染性疾病的診斷意義重大。11、藥物基礎(chǔ)研究與藥物臨床測試：通過藥物相關(guān)的基因檢測結(jié)果，能為制定個(gè)體化給藥方案提供科學(xué)依據(jù)，目前不少創(chuàng)業(yè)公司聚焦研究藥物相關(guān)基因與藥物代謝動(dòng)力學(xué)和產(chǎn)生藥物不良反應(yīng)個(gè)體的相關(guān)性，建立中國人臨床用藥數(shù)據(jù)庫；該門類下有祖源分析、疾病易感基因篩查、寵物基因檢測、DNA應(yīng)用商店等細(xì)分領(lǐng)域。

RNA抽提知多少。今天小編帶來滿滿的干貨，RNA提取小課堂開課啦，我們就來聊一聊關(guān)于RNA抽提的那些事兒吧~希望對(duì)于正在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的小伙伴們提供一些幫助，前排搬好小板凳，敲黑板劃重點(diǎn)啦~加入1ml預(yù)冷的75%乙醇，輕輕將整塊沉淀吹起懸浮，此處千萬注意別把RNA沉淀吹散，因?yàn)镽NA吹散后很難通過離心重新聚集在一起，最終導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。RNA抽提試劑盒。5.使用Rnase-free的雙蒸去離子水或其他緩沖液溶解RNA，否則容易導(dǎo)致RNA降解。

DNA與RNA提取注意事項(xiàng)。RNA制備的關(guān)鍵是要抑制細(xì)胞中的RNA分解酶和防止所用器具及試劑中的RNA分解酶的污染。這樣做的唯一目的就是兩個(gè)：一是小心RNAse的污染降解RNA二是動(dòng)作過度暴力破壞RNA的完整性。4. 一般RNA電泳應(yīng)該是做甲醛變性電泳但是一般的瓊脂糖電泳也可以需要上樣量稍微大些并且跑電泳的時(shí)間越短越好(這樣也是為了減少外界RNAse對(duì)RNA的降解)跑完電泳立刻觀察。

干貨 | 實(shí)驗(yàn)篇之RT-PCR.逆轉(zhuǎn)錄（reverse transcription）是以 RNA 為模板合成 DNA 的過程，即 RNA 指導(dǎo)下的 DNA 合成，逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)包括3大要素，分別是引物、逆轉(zhuǎn)錄酶和 RNA 模板：可將已確定的高質(zhì)量 RNA 模板同樣品混合，同高質(zhì)量 RNA 模板比較產(chǎn)量以檢測 RNA 抑制劑；① RNA 模板質(zhì)量差，需要重新制備 RNA 模板，可通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)量。③ 起始的 RNA 模板量低，需要減少稀釋倍數(shù)或增加 RNA 模板量。

核酸存在于所有動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì)胞、微生物內(nèi)、生物體內(nèi)的核酸常與蛋白質(zhì)結(jié)合形成核蛋白。離心柱提取離心柱技術(shù)是用于微量核酸分離純化的較為簡單的方法，屬于硅吸附方法的一種，在原理上可分為三個(gè)部分：①利用裂解液促使細(xì)胞破碎，使細(xì)胞中的核酸釋放出來。②把釋放出來的核酸特異吸附在特定的硅載體上，這種載體只對(duì)核酸有較強(qiáng)的親和力和吸附力，對(duì)其他生化成分如蛋白質(zhì)、多糖、脂類則基本不吸附，因而離心時(shí)被甩出柱子。

初步搞定恒溫?cái)U(kuò)增分子診斷（RPA/ERA）重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)，RPA, recombinase polymerase amplification酶促重組等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，ERA, Enzymatic Recombinase Amplification重組酶，recombinase，同引物形成蛋白-核酸復(fù)合物，指導(dǎo)引物與模板結(jié)合，起到定位作用；DNA聚合酶，DNA polymerase，以DNA為模板，利用dNTP合成子代DNA。2、當(dāng)引物尋找到配對(duì)DNA模板，ATP水解供應(yīng)能量，重組酶離開引物，并在DNA聚合酶的作用下合成新DNA鏈；

PCR引物設(shè)計(jì)遵循的規(guī)律精彩推薦。即使其他所有參數(shù)都是最優(yōu)的，引物設(shè)計(jì)不好可引起非特異的擴(kuò)增和或引物二聚體形成，導(dǎo)致PCR產(chǎn)物較少或根本沒有產(chǎn)物，接下來主要介紹PCR引物設(shè)計(jì)的一般規(guī)律。一個(gè)帶有自身同源序列的引物可以回折形成部分雙鏈的發(fā)夾結(jié)構(gòu)，類似地，引物之間的同源可能引起引物二聚體的形成，.PCR反應(yīng)時(shí)，相對(duì)于模板而言，引物濃度高很多，引物之間相互退火要比引物與模板之間退火容易得多。

引物或探針不佳: 重新設(shè)計(jì)更好的引物和探針。模板中存在抑制物，或模板濃度過高。引物設(shè)計(jì)不夠優(yōu)化：應(yīng)避免引物二聚體和發(fā)夾結(jié)構(gòu)的出現(xiàn)。引物濃度不佳：適當(dāng)降低引物的濃度，并注意上下游引物的濃度配比。鎂離子濃度過高：適當(dāng)降低鎂離子濃度，或選擇更合適的mix試劑盒。模板有基因組的污染：RNA提取過程中避免基因組DNA的引入，或通過引物設(shè)計(jì)避免非特異擴(kuò)增。鎂離子濃度過高：適當(dāng)降低鎂離子濃度，或選擇更合適的 mix 試劑盒。