免疫比濁法（Turbidimetric inhibition immuno assay）是臨床常用的檢測技術(shù)，是抗原抗體結(jié)合動(dòng)態(tài)測定方法^[1]。其原理為液相沉淀試驗(yàn)，即抗原與抗體在特殊稀釋系統(tǒng)中反應(yīng)而且比例合適(一般規(guī)定抗體過量)時(shí)，形成小分子可溶性免疫復(fù)合物，在稀釋系統(tǒng)中的促聚劑或者增濁劑作用下，自液相析出，迅速形成大分子免疫復(fù)合物微粒，使反應(yīng)液出現(xiàn)濁度。在抗體稍微過量且恒量的情況下，形成的免疫復(fù)合物量隨檢測樣本中抗原量增加而增加，濁度亦隨之增大，通過測定反應(yīng)液的濁度與一系列標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，即可計(jì)算出樣本中抗原的含量，待測抗原量與反應(yīng)溶液的濁度呈正相關(guān)。今天，我們就一起來了解一下免疫比濁檢測技術(shù)。

免疫透射比濁法優(yōu)點(diǎn)：簡便快速，結(jié)果準(zhǔn)確性較好，抗干擾能力較強(qiáng)，能用一般比色儀、全自動(dòng)或半自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行測試，儀器試劑價(jià)格相對(duì)低廉。不足：①抗體用量較大，需要保證反應(yīng)體系中抗體始終保持過量，但極度過剩時(shí)易導(dǎo)致免疫復(fù)合物分離，嚴(yán)重影響結(jié)果準(zhǔn)確性；②溶液中免疫復(fù)合物分子若過小則阻擋不了光線的通過；若數(shù)量太少則對(duì)光通量影響不大；靈敏度較散射比濁法低；③透射比濁測定在抗原-抗體反應(yīng)的第二階段，檢測需在抗原-抗體反應(yīng)達(dá)到平衡后進(jìn)行，耗時(shí)較長。第一種情況抗原過剩結(jié)果會(huì)有偏低情況出現(xiàn)，對(duì)于這種情況，如羅氏的微量白蛋白檢測，通過增加一種試劑即抗原過剩檢測試劑，檢測反應(yīng)杯內(nèi)是否含有沒有反應(yīng)的過剩的抗原，如有出現(xiàn)報(bào)警，建議稀釋測試。第二種情況IC通過促聚劑或者增濁劑使得免疫復(fù)合物出現(xiàn)可檢測到的濁度改變^[3]。第三種情況全自動(dòng)化學(xué)儀的檢測周期固定，在固定的周期內(nèi)進(jìn)行檢測，不影響結(jié)果時(shí)間。

散射比濁法優(yōu)點(diǎn)：線性范圍寬，速率散射比濁法檢測光強(qiáng)度變化的速率，在某一時(shí)間點(diǎn)抗原-抗體反應(yīng)速率最快，單位時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生的免疫復(fù)合物含量達(dá)到最大值，散射光強(qiáng)度變化亦最大，此即為速率峰。速率峰的峰值與抗原濃度正相關(guān)。速率散射比濁法自動(dòng)化程度高，具有快速、靈敏、準(zhǔn)確、精密等優(yōu)點(diǎn)，穩(wěn)定性好、自動(dòng)化程度高、節(jié)省試劑，儀器和試劑價(jià)格比較貴，對(duì)抗體質(zhì)量要求很高，需特定的分析儀器。

常見的干擾因素包括：

1、標(biāo)本因素：（1）脂血：樣本中含有大量乳糜顆粒引起脂濁，乳糜顆粒可以散射光線，使?jié)岫仍黾?，透光度下降，吸光度增加，從而干擾結(jié)果；（2）黃疸：膽紅素及其衍生物在特定波長下有光吸收，引起本底吸光度的升高，從而干擾結(jié)果；（3）溶血：血紅蛋白濃度越高，其本身吸光度對(duì)檢測結(jié)果的干擾程度越高；（4）標(biāo)本離心不徹底或反復(fù)凍融；

3、內(nèi)源性干擾物質(zhì)：RF、嗜異性抗體、人抗動(dòng)物抗體、自身抗體、M蛋白等，試劑抗體的特異性要強(qiáng)。

4、鉤狀效應(yīng)^[4]：在抗體量恒定的溶液中加入抗原，免疫復(fù)合物的生成量隨著抗原量的增加而增加，當(dāng)達(dá)到峰值之后，則隨著抗原量的增加而減少；抗原過剩檢測試劑提示是否需要稀釋測試。

5、其他藥物干擾等。

目前，臨床檢測中心開展的常規(guī)項(xiàng)目中，抗鏈球菌溶血素O抗體（ASO）、類風(fēng)濕因子（RF）、補(bǔ)體C3、C4、免疫球蛋白A、免疫球蛋白M、免疫球蛋白G、免疫球蛋白輕鏈（KAP）、輕鏈（LAM）、前白蛋白（PA）、胱抑素C（CYS-C）、載脂蛋白A、載脂蛋白B、Lp(α)、轉(zhuǎn)鐵蛋白（TRF）、尿總蛋白（TPU）、微量白蛋白（mALB）等項(xiàng)目均采用免疫比濁法檢測。

以ASO、RF為例進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室比對(duì)，ASO為抗鏈球菌溶血素O抗體，升高說明可能存在溶血性鏈球菌感染。鏈球菌感染可導(dǎo)致風(fēng)濕熱，常見的是風(fēng)濕性心臟病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等，在風(fēng)濕熱引起的風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的確診中，具有重要參考價(jià)值。少數(shù)肝炎、腎病綜合征、多發(fā)性骨髓瘤等可見升高^[5]。RF為類風(fēng)濕因子，是診斷類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的重要血清學(xué)標(biāo)志之一，升高常見于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、自身免疫系統(tǒng)疾病、感染等^[6]。

用兩種方法分別檢測ASO和RF，結(jié)果顯示：透射比濁法具有較低的檢出限及較高的精密度；散射比濁法具有較寬的檢測范圍^[7-12]。近年來免疫透射比濁逐步成熟^[13]，在實(shí)際工作中，往往透射比濁法檢測更快捷，檢出限更低，結(jié)果更準(zhǔn)確，且室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)結(jié)果均顯示透射比濁法測ASO和RF有較好的重復(fù)性和穩(wěn)定性，血樣可直接與生化檢查樣本合用，降低了采血成本，檢測時(shí)間短等優(yōu)勢(shì)，總之，兩種檢測方法都有各自的優(yōu)缺點(diǎn)，相對(duì)而言，免疫透射法更加實(shí)用和便捷。

[1] 李金明,劉輝.《臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)》，北京，科學(xué)出版社，2015.

[2] 彭鳳. 免疫透射比濁測定技術(shù)的進(jìn)展和分析特性[J]. 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué), 2012, 27(004):252-256.

[3]王會(huì)中,徐蓉.定量免疫分析技術(shù)的應(yīng)用現(xiàn)狀與展望[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2017,40(6),478-480.

[4]賈珂珂,孫文苑,聶睿等,免疫透射比濁法常見干擾因素的識(shí)別與應(yīng)對(duì)策略[J],檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2021,36(4):362-368.

[5]尚紅等.《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》第4版，北京，人民衛(wèi)生出版社，2014.

[6] 中國醫(yī)師協(xié)會(huì)風(fēng)濕免疫科醫(yī)師分會(huì)自身抗體檢測專業(yè)委員會(huì). 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎相關(guān)自身抗體檢測的臨床應(yīng)用專家共識(shí)[J].中華內(nèi)科雜志, 2021,60(6) : 516-521.

[7]羅氏《抗鏈球菌溶血素O檢測試劑盒》說明書

[8]羅氏《類風(fēng)濕因子檢測試劑盒》說明書

[9]國賽免疫測定特定蛋白比濁試劑盒抗鏈球菌溶血素O測定試劑盒使用說明書

[10]國賽免疫測定特定蛋白比濁試劑盒類風(fēng)濕因子測定試劑盒使用說明書

[11]《蘇州市獨(dú)墅湖醫(yī)院臨床檢測中心抗鏈球菌溶血素O（ASO）定量檢測性能驗(yàn)證報(bào)告》

[12]《蘇州市獨(dú)墅湖醫(yī)院臨床檢測中心類風(fēng)濕因子RF定量檢測性能驗(yàn)證報(bào)告》

[13] 李家明,康斌.免疫透射和免疫散射比濁法測定免疫球蛋白和補(bǔ)體的比較分析[J],現(xiàn)代診斷與治療,2014,25(18):4224-4225.