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人乳頭瘤病毒核酸檢測及基因分型試劑盒（PCR-反向點雜交法）說明書 【產(chǎn)品名稱】 通用名稱：人乳頭瘤病毒核酸檢測及基因分型試劑盒（PCR-反向點雜交法） 【包裝規(guī)格】 作I者：疾控科研試劑博客 聯(lián)I系：I99I-4747-I94 單管單人份，24人份/盒。 【預期用途】 本試劑盒適用于定性檢測人宮頸脫落細胞樣本和生殖泌尿道分泌物中 28 種人乳頭瘤病毒(HPV)基因型別的核酸，包括： 15 種常見高風險HPV 型別：16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，66，68，82； 3 種少見高風險HPV 型別：26，53，73； 10 種低風險HPV 型別：6，11，40，42，43，44，54，61，81，83。 由于未做相關驗證，本產(chǎn)品不能用于宮頸癌篩查相關用途。 本試劑盒檢測結果僅供臨床參考，不能單獨作為確診或排除病例的依據(jù)。 【檢驗原理】 本試劑盒針對人乳頭瘤病毒基因組 L1 區(qū)設計特異性引物和探針，同時以β-globin 為參比基因設計引物探針，并將特異性探針包被在醋酸纖維膜的不同區(qū)域制備型特異性識別膜條。通過生物素標記的引物進行靶片斷擴增，擴增產(chǎn)物和膜條上的型特異性探針進行液相雜交，雜交反應結束后經(jīng)過洗滌確保靶標中的特異性片斷和特異性探針結合；最后通過生物素-鏈霉親和素反應系統(tǒng)進行顯色反應，對顯色結果進行分析，從而對樣本中的 28 種人乳頭瘤病毒進行 DNA 分型。 【主要組成成分】
2. 不同批號試劑盒的以上成分不可以互換使用。 3. 可使用本試劑盒自帶細胞裂解液進行核酸提取，也可使用商品化的核酸提取試劑盒：廣州和實生物技術有限公司生產(chǎn)的核酸提取或純化試劑（備案號：粵穗械備 20140038 號）。 4. 本試劑盒組分不包含配套的樣本采集設備。 【儲存條件及有效期】 儲存條件：HPV分型 PCR 試劑保存于-20±5℃，避免反復凍融；反向點雜交試劑保存于 2-8℃。有效期 9 個月。運輸采用干冰（或者冰袋）保持低溫，72 小時內不影響本試劑盒的檢測性能。 試劑使用時開瓶（復融）8 小時內其檢測性能不受影響。試劑使用前反復凍融次數(shù)不應超過 4 次。 生產(chǎn)日期：詳見產(chǎn)品標簽。 【適用儀器】 ABI 9700 型 PCR 儀，上海精宏 DKZ-2 型電熱恒溫振蕩水槽，愛普生 J232A 掃描儀，達安膜條斑點識別分析系統(tǒng)。 【樣本要求】 1 2. 受檢需知： 月經(jīng)正常婦女，在月經(jīng)來潮后 10～18 天為最佳檢查時間；檢查前3 天內不應使用陰道內藥物或做陰道沖洗；檢查前 24 小時內不應有性行為。 3. 樣本采集： 宮頸脫落細胞樣本：醫(yī)護人員先用窺陰器或陰道張開器暴露宮頸，用宮頸刷置于宮頸口，順時針旋轉 4－6 周以獲取足量的上皮細胞，然后取出宮頸刷置于盛有 2ml 生理鹽水的無菌小試管中備檢。若樣本黏液過多或者含血量過多應該盡量重新取樣。 女性生殖泌尿道分泌物樣本：首先使用無菌生理鹽水棉球洗凈尿道口，再用棉拭子插入尿道約 2CM，然后捻動棉拭子，最后將棉拭子放入細胞保存液中，密閉送檢。采集尿道樣本時，受檢者必須在采集前 2 個小時禁止小便。 男性生殖泌尿道分泌物樣本：使用細小的尿道棉拭子，插入男性尿道 2-4CM，然后捻動尿道棉拭子取出分泌物，最后將尿道棉拭子放入細胞保存液中，密閉送檢。 4. 樣本保存和運送：通常情況下，宮頸脫落細胞樣本采集后置于生理鹽水的無菌小試管中，生殖泌尿道分泌物樣本采集后置于細胞保存液中，均可立即用于測試。如需保存，置于 2-8℃保存不應超過兩周，-20±5℃保存不應超過一年。樣本運送時應采用 0℃冰壺。 注：樣本采集及保存中使用的宮頸刷和細胞保存液，推薦使用江蘇健友醫(yī)療科技有限公司生產(chǎn)的一次性使用無菌宮頸采樣器和細胞保存液。 【檢驗方法】 1.樣本處理和核酸提?。颖咎幚韰^(qū)） 本試劑盒中的陰性質控品參與提取，用于對環(huán)境進行監(jiān)控；HPV 陽性質控品參與提取，用于 PCR 檢測試劑的質控。 可采用廣州和實生物技術有限公司生產(chǎn)的核酸提取試劑盒（核酸提取或純化試劑：粵穗械備 20140038 號），具體操作步驟請按照試劑盒說明書指引進行。也可采用本試劑盒自帶細胞裂解液進行核酸提取，該提取試劑含有顏色示蹤劑，能指示模板加入與否。具體操作如下： 1.1振蕩宮頸刷保存管或棉拭子保存管 10-30 秒，使細胞充分落入液體，取振蕩后液體 0.5ml-1.0ml（如果細胞數(shù)量少可以加大體積到 1.5ml）轉至 1.5ml 離心管中； 1.2 10,000rpm 離心 3 分鐘，棄上清； 1.3 樣品沉淀中加入 1ml 無菌生理鹽水，洗滌沉淀，10,000rpm 離心 3 分鐘，棄上清； 1.4 樣品沉淀中加入 50μl 細胞裂解液，振蕩 60 秒，充分懸浮細胞沉淀，備用； |
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