1101無(wú)菌檢查法無(wú)菌檢查法系……未發(fā)現(xiàn)微生物污染。無(wú)菌檢查應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行，試驗(yàn)環(huán)境必須達(dá)到無(wú)菌檢查的要求，檢驗(yàn)全過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格逄守?zé)o菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。單向流空氣區(qū)域、工作臺(tái)面及受控環(huán)境應(yīng)定期按醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度確認(rèn)。隔離系統(tǒng)應(yīng)定期按相關(guān)的要求進(jìn)行驗(yàn)證，其內(nèi)部環(huán)境的潔凈度須符合無(wú)菌檢查的要求。日常檢驗(yàn)需對(duì)試驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行監(jiān)測(cè)。學(xué)習(xí)：“應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行”，這句話此版藥典仍是如此表述，沒(méi)有實(shí)力改造的情況下，C+A級(jí)送風(fēng)環(huán)境應(yīng)該還能再次維持一個(gè)藥典周期吧?！笆芸亍眱蓚€(gè)字為新增，對(duì)于檢驗(yàn)潔凈環(huán)境，受控主要的關(guān)注指標(biāo)應(yīng)該是懸浮粒子、浮游菌和沉降菌，當(dāng)然其它如壓差、溫濕度等的指標(biāo)和監(jiān)測(cè)頻度也應(yīng)滿足9205《藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室微生物監(jiān)測(cè)和控制指導(dǎo)原則》的要求。培養(yǎng)基……（未變化，略）。培養(yǎng)基的制備及培養(yǎng)條件培養(yǎng)基可按以下處方制備，亦可使用按該處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基或商品化的預(yù)制培養(yǎng)基。配制后應(yīng)采用驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。制備好的培養(yǎng)基若不即時(shí)使用，應(yīng)置于無(wú)菌密閉容器中，在2~25°C 、避光的環(huán)境下保存，并在經(jīng)驗(yàn)證的保存期內(nèi)使用。學(xué)習(xí)：由原來(lái)的的“成品培養(yǎng)基”調(diào)整為“商品化的預(yù)制培養(yǎng)基”，更易于理解。應(yīng)注意最后標(biāo)紅的調(diào)整內(nèi)容。不再?gòu)?qiáng)調(diào)“非密閉-三周”、“密閉-一年”的規(guī)定，便于實(shí)踐掌握并防止浪費(fèi)，更適合國(guó)情；當(dāng)然，你最好有一個(gè)穩(wěn)健的驗(yàn)證過(guò)程和結(jié)果，以支持你的封閉條件和保存周期。1. 硫乙酵酸鹽流體培養(yǎng)基……葡萄糖／無(wú)水葡萄糖5.5g/5.0g 刃天青溶液1. 0ml…………分裝至適宜的容器中，其裝量與容器高度的比例應(yīng)符合培養(yǎng)結(jié)束后培養(yǎng)基氧化層（粉紅色）不超過(guò)培養(yǎng)基深度的1/2 。滅菌。在供試品接種前，培養(yǎng)基氧化層的高度不得超過(guò)培養(yǎng)基深度的1/3 , 否則……學(xué)習(xí)：配方中允許使用葡萄糖。配制滅菌后的培養(yǎng)基使用前質(zhì)量檢查，氧化層由原來(lái)的“1/5”調(diào)整為現(xiàn)在的“1/3”，雖然現(xiàn)在看似標(biāo)準(zhǔn)變松了，但確實(shí)更符合檢驗(yàn)實(shí)踐，也更容易判斷。2.~7.……（省略）8. 馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)學(xué)習(xí)：新增一種培養(yǎng)基，用于菌液制備中“黑曲”的增菌培養(yǎng)。對(duì)于培養(yǎng)基，尤其是干粉培養(yǎng)基，你真的需要核對(duì)標(biāo)簽上的處方，避免與藥典的差異。培養(yǎng)基的適用性檢查無(wú)菌性檢查 無(wú)菌檢查用的……或與供試品的無(wú)菌檢查同時(shí)進(jìn)行。無(wú)菌性檢查每批培養(yǎng)基一般隨機(jī)取不少于5 支（瓶），置各培養(yǎng)基規(guī)定的溫度培養(yǎng)14 天， 應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。學(xué)習(xí)：應(yīng)考慮實(shí)踐中用于無(wú)菌性檢查培養(yǎng)的試管裝滅菌培養(yǎng)基與無(wú)菌檢驗(yàn)用的三角瓶裝培養(yǎng)基在滅菌方法驗(yàn)證時(shí)的兩種包裝的溫度、F0等結(jié)果。否則，也不要在乎那幾瓶了。這里的支/瓶，應(yīng)該分別對(duì)應(yīng)管法和膜法。菌種 培養(yǎng)基靈敏度檢查所用的菌株傳代次數(shù)不得超過(guò)5 代（從菌種保存中心獲得的干燥菌種為第0 代），并采用適宜的菌種保藏技術(shù)進(jìn)行保存和確認(rèn)， 以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性?！–MCC一堆數(shù)字，略）學(xué)習(xí)：這個(gè)“確認(rèn)”在15版藥典時(shí)，放在了9203《藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則》中，要求“標(biāo)準(zhǔn)貯備菌株應(yīng)進(jìn)行純度和特性確認(rèn)?！匾獣r(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)工作菌株的特性和純度進(jìn)行確認(rèn)?！币簿褪钦f(shuō)，菌種的確認(rèn)不在作為指導(dǎo)原則存在，而應(yīng)該落實(shí)在文件、實(shí)踐中了。已知菌種確認(rèn)的方法有菌落形態(tài)觀察描述/拍照、生化檢定/生化試劑盒、DNA……菌液制備接種金葡、銅綠、枯草的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆陳液體培養(yǎng)基中或胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基上，接種生抱梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中， 30~35°C 培養(yǎng)18~24 小時(shí)；接種白念的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上， 20 ~ 25°C 培養(yǎng)2~3 天， 上述培養(yǎng)物用pH7. 0 無(wú)菌氯化鈉－蛋白脈緩沖液或0. 9 ％ 無(wú)菌氯化鈉溶液制成適宜濃度菌懸液。接種黑曲霉至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基或馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上， 20~25°C 培養(yǎng)5~7 天或直到獲得豐富的孢子，加入適量含 0. 05%(ml/ml) 聚山梨酯80 的……。然后，采用適宜的方法吸出抱子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，用……制成適宜濃度的孢子懸液。學(xué)習(xí)：白念的培養(yǎng)時(shí)間由24~4 8小時(shí)調(diào)整為2~3 天；終于白念可以長(zhǎng)得很好了，菌懸液不再?gòu)?qiáng)制要求100cfu/ml以下（下文取用量也調(diào)整為不大于100cfu/ml）；洗黑曲孢子的聚山梨酯80的溶液不再?gòu)?qiáng)制3~5ml，應(yīng)根據(jù)孢子的噴落量靈活調(diào)整。一個(gè)圖簡(jiǎn)介菌種類型;菌懸液若在室溫下放置，一般應(yīng)在2 小時(shí)內(nèi)使用……在驗(yàn)證過(guò)的貯存期內(nèi)使用。培養(yǎng)基接種 取適宜裝量的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基7支，分別接種不大于l00cfu 的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生抱梭菌各2 支，另1 支不接種作為空白對(duì)照；取適宜裝量的胰酪大豆陳液體培養(yǎng)基7 支，分別接種不大于100cfu 的枯草芽抱桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2 支，另1支不接種作為空白對(duì)照。接種細(xì)菌的培養(yǎng)管培養(yǎng)時(shí)間不超過(guò)3 天，接種真菌的培養(yǎng)管培養(yǎng)時(shí)間不得超過(guò)5天。逐日觀察結(jié)果。學(xué)習(xí)：確實(shí)，真菌培養(yǎng)時(shí)間要稍微長(zhǎng)一些，其它的3天之內(nèi)生長(zhǎng)很好了，時(shí)間長(zhǎng)了反而污染環(huán)境或者造成其他實(shí)驗(yàn)室危害。這樣改操作性更強(qiáng)了。修訂專性需氧菌的培養(yǎng)基用量，不再?gòu)?qiáng)制要求9ml。刪除“逐日觀察結(jié)果”（不僅此處，無(wú)菌檢查的樣品觀察也同步修改了，見(jiàn)后文）。結(jié)果判定空白對(duì)照管應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)……檢查符合規(guī)定。稀釋液、沖洗液及其制備方法稀釋液、沖洗液配制后應(yīng)采用驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。1. ……必要時(shí)濾過(guò)使澄清……。2. ……必要時(shí)濾過(guò)使澄清……。根據(jù)供試品的特性……加入表面活性劑或中和劑等。羨慕：使用商品的預(yù)制稀釋液、沖洗液的請(qǐng)接收我的敬仰，只需要驗(yàn)收檢查、審計(jì)就行了。方法適用性試驗(yàn)進(jìn)行產(chǎn)品無(wú)菌檢查時(shí)，應(yīng)進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)，以確認(rèn)所采用的方法適合于該產(chǎn)品的無(wú)菌檢查。若檢驗(yàn)程序或產(chǎn)品發(fā)生變化可能影響檢驗(yàn)結(jié)果時(shí)，應(yīng)重新進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)。學(xué)習(xí)：這里“檢驗(yàn)程序”應(yīng)結(jié)合9203《藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則》和1101仔細(xì)思考。方法適用性試驗(yàn)按……進(jìn)行方法確認(rèn)。菌種及菌液制備金葡、枯草、生孢、白念、黑曲霉的菌株及菌液制備同培養(yǎng)基靈敏度檢查。大腸埃希菌的菌液制備同金黃色葡萄球菌。學(xué)習(xí)：大腸埃希菌未參與培養(yǎng)基靈敏度檢查，在1101中，只參與方法適用性。薄膜過(guò)濾法 按供試品的無(wú)菌檢查要求，取每種培養(yǎng)基規(guī)定接種的供試品總量，采用薄膜過(guò)濾法過(guò)濾，沖洗，在最后一次的沖洗液中加入不大于100cfu 的試驗(yàn)菌，過(guò)濾。加培養(yǎng)基至濾筒內(nèi)， 接種金葡、大腸、生孢的濾筒內(nèi)加硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基；接種枯草、白念、黑曲霉的濾筒內(nèi)加胰酪大豆脈液體培養(yǎng)基。另取一裝有同體積培養(yǎng)基的容器，加入等量試驗(yàn)菌，作為對(duì)照。置規(guī)定溫度培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間不得超過(guò)5 天。學(xué)習(xí)：哪種菌加入哪種培養(yǎng)基內(nèi)明確出來(lái)，防止錯(cuò)誤，利于方法學(xué)實(shí)踐。疑問(wèn)：“在最后一次的沖洗液中加入不大于100cfu 的試驗(yàn)菌”這一步怎么具體操作，比如扎管注入濾筒或者扎塞，注入沖洗液瓶子中？直接接種法 取符合直接接種法培養(yǎng)基用量要求的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基6 管，分別接人不大于100cfu的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、生抱梭菌各2 管；取符合直接接種法培養(yǎng)基用黛要求的胰酪大豆脈液體培養(yǎng)基6 管，分別接人不大于100cfu的枯草芽抱桿菌、白色念珠菌、黑曲霖各2管。其中1 管按供試品的無(wú)菌檢查要求，接入每支培養(yǎng)基規(guī)定的供試品接種最，另1 管作為對(duì)照，置規(guī)定的溫度培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間不得超過(guò)5 天。結(jié)果判斷 與對(duì)照管比較……并重新進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)。方法適用性試驗(yàn)也可與供試品的無(wú)菌檢查同時(shí)進(jìn)行。供試品的無(wú)菌檢查無(wú)菌檢查法包括薄膜過(guò)濾法和直接接種法。只要供試品性質(zhì)允許，應(yīng)采用薄膜過(guò)濾法。供試品無(wú)菌檢查所采用的檢查方法和檢驗(yàn)條件應(yīng)與方法適用性試驗(yàn)確認(rèn)的方法相同。學(xué)習(xí)：考驗(yàn)方法學(xué)確認(rèn)的設(shè)計(jì)和檢驗(yàn)SOP的設(shè)計(jì)是否能夠緊密聯(lián)系。無(wú)菌試驗(yàn)過(guò)程中，若需使用表面活性劑、滅活劑、中和劑等試劑，應(yīng)證明其有效性，且對(duì)微生物無(wú)毒性。檢驗(yàn)數(shù)量 檢驗(yàn)數(shù)量……不包括陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)的供試品用量。檢驗(yàn)量  是指供試品每個(gè)最小包裝接種至每份培養(yǎng)基的最小量（g或ml）……若每支（瓶）供試品的裝量按規(guī)定足夠……全部過(guò)濾。學(xué)習(xí)：這里注意“裝量”，裝量不是規(guī)格量，這個(gè)指標(biāo)要在方法學(xué)階段結(jié)合理化的測(cè)試結(jié)果考慮。這也是“檢驗(yàn)程序”的一部分，若裝量有改變，方法學(xué)就要考慮考慮了?！氨?”有調(diào)整，見(jiàn)后文。陽(yáng)性對(duì)照 應(yīng)根據(jù)……加菌量不大于100cfu , 供試品用量同供試品無(wú)菌檢查時(shí)每份培養(yǎng)基接種的樣品量。陽(yáng)性對(duì)照管培養(yǎng)不超過(guò)5 天， 應(yīng)生長(zhǎng)良好。學(xué)習(xí)：陽(yáng)性對(duì)照的培養(yǎng)時(shí)間由72小時(shí)內(nèi)，調(diào)整為“不超過(guò)5 天”?？紤]特殊情況下陽(yáng)性菌生長(zhǎng)慢的情況。建議較好設(shè)計(jì)批檢驗(yàn)記錄，減少無(wú)謂勞動(dòng)量。陰性對(duì)照 供試品……不得有菌生長(zhǎng)。供試品處理及接種培養(yǎng)基操作時(shí)，……內(nèi)容物。除另有規(guī)定外……接種培養(yǎng)基。1. 薄膜過(guò)濾法薄膜過(guò)濾法一般應(yīng)采用封閉式薄膜過(guò)濾器，根據(jù)供試品及其溶劑的特性選擇濾膜材質(zhì)。無(wú)菌檢查用的濾膜孔徑應(yīng)不大于0.45μm 。濾膜直徑約為50mm, 若使用其他尺寸的濾膜，應(yīng)對(duì)稀釋液和沖洗液體積進(jìn)行調(diào)整，并重新驗(yàn)證。使用時(shí)，應(yīng)保證濾膜在過(guò)濾前后的完整性。水溶性供試液過(guò)濾前，一般應(yīng)先將少量的沖洗液過(guò)濾……若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量一般為100ml, 總沖洗量一般不超過(guò)500ml, 最高不得超過(guò)1000ml, 以避免濾膜上的微生物受損傷。學(xué)習(xí)：2020版藥典在此節(jié)的第一段行文順序進(jìn)行了調(diào)整。紅色部分為增加內(nèi)容。注意“總沖洗量一般不超過(guò)500ml”的規(guī)定。水溶性液體供試品 取規(guī)定量……。水溶性固體和半固體供試品  取規(guī)定量……。學(xué)習(xí)：“半固體供試品”為新增樣品類型?？扇苡谑耐樗岙惐サ母鄤┖宛ば杂蛣┕┰嚻?nbsp; 取規(guī)定量，混合至適量的無(wú)菌十四烷酸異丙酯中（無(wú)菌十四烷酸異丙酯的制備可采用薄膜過(guò)濾法過(guò)濾除菌，選用孔徑為0. 22μm 的適宜濾膜，或其他適宜的滅菌方法），……或?qū)⒏魅萜髦谩?nbsp;20°C 或其他適宜溫度冷凍約1 小時(shí)，取出，迅速消毒供試品開(kāi)啟部位或閥門(mén)，正置容器， 用無(wú)菌鋼錐或針樣設(shè)備以無(wú)菌操作迅速在與容器閥門(mén)結(jié)構(gòu)相匹配的適宜位置鉆一小孔，……。裝有藥物的注射器供試品 ……。具有導(dǎo)管的醫(yī)療器械（輸血、輸液袋等）供試品 除另有規(guī)定外，取規(guī)定最，每個(gè)最小包裝用適量的（通常50~100ml) 沖洗液分別沖洗內(nèi)壁，收集沖洗液于無(wú)菌容器中，然后照水溶性液體供試品項(xiàng)下方法操作。同時(shí)應(yīng)采用適宜的方法對(duì)包裝中所配帶的針頭等要求無(wú)菌的部件進(jìn)行無(wú)菌檢查。學(xué)習(xí)：增加了“除另有規(guī)定外”，有單獨(dú)批準(zhǔn)的情況應(yīng)照相應(yīng)正文執(zhí)行。本節(jié)最后一句進(jìn)行了調(diào)整，表述更準(zhǔn)確。2. 直接接種法……混懸液等非澄清水溶性液體供試品、固體供試品、非水溶性供試品、敷料供試品、腸線、縫合線等供試品 ……。滅菌醫(yī)用器械供試品 除另有規(guī)定外，取規(guī)定量……。學(xué)習(xí)：增加了“除另有規(guī)定外”，有單獨(dú)批準(zhǔn)的情況應(yīng)照相應(yīng)正文執(zhí)行。放射性藥品……。培養(yǎng)及觀察將上述接種供試品后的培養(yǎng)基容器分別按各培養(yǎng)基規(guī)定的溫度培養(yǎng)不少于14 天；接種生物制品的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的容器應(yīng)分成兩等份，一份置30~35°C 培養(yǎng)，一份置20~25℃培養(yǎng)。培養(yǎng)期間應(yīng)定期觀察并記錄是否有菌生長(zhǎng)。如在加入供試品后或在培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)14 天后，不能從外觀上判斷有無(wú)微生物生長(zhǎng)，可取該培養(yǎng)液不少于1ml 轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中，將原始培養(yǎng)物和新接種的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)不少于4 天，觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否再出現(xiàn)渾濁；或取培養(yǎng)液涂片，染色，鏡檢，判斷是否有菌。學(xué)習(xí)：取消了“逐日觀察”的規(guī)定，那問(wèn)題是，隔幾天觀察一次呢……規(guī)定了疑似培養(yǎng)液的最少轉(zhuǎn)種量，并且原始培養(yǎng)物和新接種的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)不少于4 天（原來(lái)規(guī)定新轉(zhuǎn)種培養(yǎng)不少于3天）?！芭囵B(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)14 天后”，作為時(shí)間操作，轉(zhuǎn)種或者直接鏡檢檢定，你更傾向于哪種呢？增加了一天，意味著檢驗(yàn)周期應(yīng)調(diào)整文14+4天。結(jié)果判斷若供試品管均澄清，或雖顯渾濁但經(jīng)確證無(wú)菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定；若供試品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長(zhǎng)，判供試品不符合規(guī)定，除非能充分證明試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效，即生長(zhǎng)的微生物非供試品所含。只有符合下列至少一個(gè)條件時(shí)方可認(rèn)為試驗(yàn)無(wú)效：(1) 無(wú)菌檢查試驗(yàn)所用的設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無(wú)菌檢查法的要求。(2) 回顧無(wú)菌試驗(yàn)過(guò)程，發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染的因素。(3) 在陰性對(duì)照中觀察到微生物生長(zhǎng)。(4) 供試品管中生長(zhǎng)的微生物經(jīng)鑒定后，確證是因無(wú)菌試驗(yàn)中所使用的物品和（或）無(wú)菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的。試驗(yàn)若經(jīng)評(píng)估確認(rèn)無(wú)效后，應(yīng)重試。重試時(shí)，重新取同量供試品，依法檢查，若無(wú)菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定；若有菌生長(zhǎng)，判供試品不符合規(guī)定。學(xué)習(xí)：原15版中此節(jié)“陽(yáng)性對(duì)照管應(yīng)生長(zhǎng)良好”刪除，“在陰性對(duì)照中觀察到微生物生長(zhǎng)”放在后文“試驗(yàn)無(wú)效”的子集中。更具條理性。“重試時(shí)，重新取同量供試品”，注意理解，這不同于OOS的擴(kuò)大調(diào)查。表1批出廠產(chǎn)品及生物制品的原液和半成品最少檢驗(yàn)數(shù)量……主表未變。注：若供試品每個(gè)容器內(nèi)的裝量不夠接種兩種培養(yǎng)基，那么表中的最少檢驗(yàn)數(shù)量應(yīng)增加相應(yīng)倍數(shù)。學(xué)習(xí)：這個(gè)“附注”需要結(jié)合表3使用，同時(shí)注意“陽(yáng)性對(duì)照”也需要同樣增加的問(wèn)題。表2上市抽驗(yàn)樣品的最少檢驗(yàn)數(shù)量……表3供試品的最少檢驗(yàn)量