1 用18s RNA作為RT-PCR的內參，應該和β-actin是一個道理，半定量的目的是要看總RNA中的目的基因mRNA的表達量，內參的目的是去除一些系統(tǒng)誤差。

2 有文獻做過比較，之所以18s RNA比β-actin好是因為它含量豐富，且任何情況下穩(wěn)定存在，所以受外界調控影響小，半定量時背景更加穩(wěn)定

3 但是不同的是18s是rRNA，沒有A尾巴，所以選它作內參時，l理論上總RNA轉錄時不能用OligodT作反轉錄引物，用隨機引物或6聚體引物,OligodT轉錄出來的可都是mRNA??！如果選β-actin就不存在這個問題，因為它mRNA，有A尾巴。

4 實際上,用18S rRNA做內參，反轉錄RNA用Oligo dT,能夠擴增出來時,對結果也不要表示懷疑.因為普通條件下的反轉不會很純粹，mRNA的含量在總RNA中只占5%，反轉時不是僅有它被反轉錄，即使是rRNA也是可以部分反轉成CDNA的，要不分離純mRNA怎么要用試劑盒進行進行磁珠吸附呢。另外，沒有反轉的rRNA和tRNA如果沒用RNA酶處理也是可以存在很長時間才會完全降解的。這樣的18S rRNA做內參是不合適的，它的表達會隋時間推移降低的。
你既然用18S rRNA做內參，就必須讓其穩(wěn)定表達。這樣在反轉錄RNA時除用Oligo dT外，還要用18S反向引物，反轉錄后的CDNA最好還用RNA酶處理一下，再高溫滅活。