生物安全二級(jí)及以上實(shí)驗(yàn)室條件和生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室級(jí)別的個(gè)人防護(hù)，如一次性醫(yī)用防護(hù)服、護(hù)目鏡、雙層手套、醫(yī)用防護(hù)口罩（如3M公司的1860/9132醫(yī)用N95口罩，口罩必須做氣密性檢測）、防護(hù)靴套?？谡值确雷o(hù)用品的佩戴一定要正確，否則等同于無防護(hù)。三級(jí)防護(hù)的個(gè)人需保證休整時(shí)間，連續(xù)工作4個(gè)小時(shí)以上會(huì)因缺氧而導(dǎo)致乏力、頭暈等不良反應(yīng)。需正確識(shí)別高強(qiáng)度工作狀態(tài)下的身體不適與病毒感染引起的早期癥狀的區(qū)別，避免產(chǎn)生不必要的心理壓力。

中東呼吸綜合征冠狀病毒（MERS）可在呼吸道樣本、血液和糞便樣本中檢出，同科屬的新型冠狀病毒（2019-nCoV）潛在具有上述特性。目前的資料表明：經(jīng)呼吸道飛沫傳播是2019-nCoV的主要傳播途徑，亦可通過接觸傳播（如手-口途徑、糞-口途徑）。因此來自2019-nCoV感染病人的非呼吸道樣本也具有潛在的感染性，應(yīng)盡量避免暴露環(huán)節(jié)（如不開蓋的血常規(guī)檢測模式）以及避免產(chǎn)生氣溶膠（離心后靜置）。不可避免的暴露性操作（如開蓋等）應(yīng)在生物安全柜中進(jìn)行。由于感染者和非感染者難以區(qū)分，應(yīng)將所有樣本視為具有感染性（標(biāo)準(zhǔn)預(yù)防），在條件不允許的情況下可不設(shè)立獨(dú)立的檢測空間，但工作人員必須佩戴外科口罩或醫(yī)用防護(hù)口罩等個(gè)人防護(hù)措施，并保證環(huán)境的生物安全。對(duì)疑似病人樣本給予更高的重視，對(duì)處理后樣本、廢棄物及環(huán)境執(zhí)行更嚴(yán)格、頻繁的消毒滅菌措施（見下述第6條）。

可依據(jù)“國衛(wèi)辦醫(yī)函【2020】53號(hào)”文件執(zhí)行。

院內(nèi)運(yùn)輸：樣本由醫(yī)護(hù)人員采集后，放入兩層一次性密封袋內(nèi)密封，置于樣本轉(zhuǎn)運(yùn)箱后，與樣本運(yùn)送人員交接，樣本由專人運(yùn)送入實(shí)驗(yàn)室。樣本運(yùn)送過程中，運(yùn)送人員應(yīng)佩戴帽子、一次性外科口罩、手套、隔離衣。

院外運(yùn)輸：按照《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定》（衛(wèi)生部令第45號(hào)）要求執(zhí)行。

文獻(xiàn)及指南報(bào)道，56℃ 30 min可滅活冠狀病毒，我們的初步試驗(yàn)表明，干浴（烤箱或恒溫箱）56℃ 30min或50℃ 60min的滅活方式不影響呼吸道樣本中RNA病毒的檢測（見圖1）。時(shí)間所限，我們對(duì)于此次新冠病毒的評(píng)估尚未完成，將在再版中更新這一內(nèi)容。

圖1 不同滅活方式對(duì)PCR檢測結(jié)果的影響

根據(jù)上述結(jié)果，并綜合其它資料，為了減少感染樣本對(duì)人和環(huán)境的潛在危害，我們初步推薦：呼吸道樣本（微生物等培養(yǎng)目的除外）先56℃干浴 60 min，靜置10 min至室溫（避免氣溶膠），然后進(jìn)行處理。

但必須強(qiáng)調(diào)的是，病毒滅活效果與其所在基質(zhì)成分有關(guān)，因?qū)嶒?yàn)條件所限，我們無法評(píng)估該方法滅活病毒的真實(shí)效果。此外，我們選擇干浴后靜置10 min是基于我們現(xiàn)有的樣本量及實(shí)驗(yàn)條件。理論上，干浴后靜置的時(shí)間越長，產(chǎn)生氣溶膠的風(fēng)險(xiǎn)越小?；诖?，干浴處理后的樣本仍視為具有感染性，其后續(xù)處理應(yīng)視同未滅活的樣本。

對(duì)檢測完成后的疑似病人樣本采用雙層塑料袋密封；對(duì)實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)生的廢液和槍頭等置于含0.5%～1%有效氯的含氯消毒液的廢液缸。上述物品經(jīng)壓力蒸汽滅菌處理。詳見《新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)室生物安全指南》（第三版）。

依據(jù)方便（臨床采樣和檢驗(yàn)科檢測）和安全原則對(duì)項(xiàng)目組合進(jìn)行安排。2019-nCoV核酸檢測項(xiàng)目宜單獨(dú)申請，單獨(dú)采樣，方便檢測。其它呼吸道病毒核酸檢測項(xiàng)目（流感、腺病毒、呼吸道合胞病毒等）則可單獨(dú)和/或組合申請。所有呼吸道樣本均應(yīng)視為潛在的感染源，并做相應(yīng)處理和防護(hù)。更重要的是建立一套完善的有關(guān)2019-nCoV檢測的管理機(jī)制，涵蓋項(xiàng)目申請、檢測時(shí)限、報(bào)告時(shí)間、報(bào)告方式、對(duì)內(nèi)對(duì)外聯(lián)系，以及分析前、中、后各種環(huán)節(jié)。

對(duì)潛在含有2019-nCoV的呼吸道樣本的操作應(yīng)在生物安全柜（biosafety cabinet）中進(jìn)行，工作狀態(tài)下遵守操作規(guī)程可保證工作人員不受侵害。生物安全柜檢定合格方能使用（包括外觀和功能、潔凈度等級(jí)、垂直氣流平均風(fēng)速、工作窗口進(jìn)風(fēng)平均風(fēng)速、照度、噪音、氣流狀態(tài)）。

操作注意事項(xiàng)：

⑴風(fēng)機(jī)運(yùn)行至少5min后方可開始操作；

⑵柜內(nèi)盡量少放物品，以免影響氣流循環(huán)；

⑶避免干擾氣流，不良行為包括手臂頻繁出入，操作者身后人員頻繁走動(dòng)，阻擋空氣格柵；

⑷在中后部操作，并不影響透過玻璃擋板觀察；

⑸柜內(nèi)不可進(jìn)行文字工作；

⑹風(fēng)機(jī)運(yùn)行至少5 min后方可關(guān)機(jī)；

⑺工作完成后、每天下班前，使用適當(dāng)消毒劑擦拭表面。

無論防護(hù)條件是否滿足要求，標(biāo)準(zhǔn)預(yù)防、不定期通風(fēng)和手衛(wèi)生是最重要的防護(hù)措施。

此外，必須牢記三個(gè)防控要素。

⑴人員：必須有安全意識(shí)，不能麻痹大意，以往及當(dāng)下的經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)表明安全意識(shí)越強(qiáng)，感染的幾率越小。

具體措施：

①無論是否處于工作狀態(tài)，無論是否在病房或是其它環(huán)境，佩戴口罩，不到萬不得已的情況，比如吃飯、喝水，都不要摘下，如果需要摘下口罩，強(qiáng)烈建議先進(jìn)行手消毒再摘下口罩；

②醫(yī)務(wù)人員盡量避免集體就餐，最好是分次就餐，減少小范圍群體性暴露；

③直接面對(duì)病人的窗口工作人員和接觸呼吸道樣本的相關(guān)人員必須嚴(yán)格執(zhí)行生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室級(jí)別的個(gè)人防護(hù)。

⑵操作：必須視所有樣本為潛在感染源，實(shí)行標(biāo)準(zhǔn)預(yù)防措施。對(duì)高危的呼吸道樣本（檢測核酸或抗原）在送達(dá)實(shí)驗(yàn)室之前滅活（見上述方法和圖1），可最大程度減少生物危害。處理呼吸道樣本必須在生物安全柜中進(jìn)行，操作過程輕柔避免飛濺。實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)生的污物必須高壓滅菌后才能運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室。

⑶環(huán)境：桌面、儀器、固定設(shè)施及地面至少每日采用0.5%～1%含氯消毒液擦拭。含氯消毒液（注意，洗必泰[氯己定]不能有效滅活病毒）、75%的酒精等消毒物品應(yīng)隨手可及，便于隨時(shí)消毒。PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)束后應(yīng)紫外照射房間及相關(guān)設(shè)施以消除核酸污染，同時(shí)殺滅病毒。紫外消毒時(shí)必須保證門窗緊閉。

呼吸道樣本（包括咽拭子、鼻咽拭子、鼻咽抽取物、痰液、呼吸道抽取物、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液等）均可。為了減少污染流程可相對(duì)固定一種樣本類型及操作簡便的方法，以便更好實(shí)施（除特殊情況下需采集特定的樣本）。對(duì)自動(dòng)核酸提取方法而言，采用帶病毒保存液的咽拭子或鼻咽拭子可避免開蓋添加生理鹽水的步驟。采樣人員必須嚴(yán)格執(zhí)行生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室級(jí)別的個(gè)人防護(hù)。樣本采集質(zhì)量嚴(yán)重影響檢測結(jié)果，需對(duì)采樣人員進(jìn)行專業(yè)培訓(xùn)，如咽拭子采集應(yīng)擦拭兩側(cè)腭弓和咽、扁桃體的分泌物。

目前RNA提取方法眾多，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)選擇簡便、高效的核酸提取方法。我們當(dāng)前使用的蛋白酶K消化，磁珠分離的全自動(dòng)核酸提取方法證明有效。由于2019-nCoV感染是突發(fā)事件，各種試劑通過快審進(jìn)入臨床最大程度解決了臨床急需，但當(dāng)前存在以下兩方面的問題給結(jié)果的報(bào)告和解釋造成了較大的困擾。

⑴不同試劑盒陽性檢出率存在較大差別；

⑵一部分試劑盒檢測ORF1ab和E及N基因，另一部分試劑盒只檢測ORF1ab和N基因，部分試劑的單陽性結(jié)果占陽性結(jié)果的20%以上。

另一個(gè)值得關(guān)注的問題是試劑的選擇還需與實(shí)驗(yàn)室的硬件設(shè)備相匹配，如有的儀器對(duì)PCR擴(kuò)增管有特別要求（100μL或者200μL）等。

基于上述問題，我們建議以陽性、可疑和陰性三種結(jié)果進(jìn)行報(bào)告，對(duì)單陽性的結(jié)果及可疑結(jié)果建議采用不同試劑盒進(jìn)行復(fù)核，并進(jìn)行備注（圖2）。部分地區(qū)可將陽性和可疑的樣本送CDC確證。

圖2 同濟(jì)檢驗(yàn)科2019-nCoV核酸檢測報(bào)告模板

參考文獻(xiàn)：

1. 國家衛(wèi)生健康委辦公廳關(guān)于醫(yī)療機(jī)構(gòu)開展新型冠狀病毒核酸檢測有關(guān)要求的通知.國衛(wèi)辦醫(yī)函【2020】53號(hào)

2. 關(guān)于印發(fā)新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案（試行第四版）的通知. 國衛(wèi)辦醫(yī)函【2020】77號(hào)

3. 新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)室生物安全指南（第三版）

4. Real-Time RT-PCR Panel for Detection 2019-Novel Coronavirus.

https://www./coronavirus/2019-ncov/lab/rt-pcr-detection-instructions.html

5.https://mp.weixin.qq.com/s/uWiOOpfxQH4c77rAFXfNgQ