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要做mtt實(shí)驗(yàn)，藥不溶于水，干怎么配呢？ 用dmso的話(huà)，怎么控制它的量，怎么過(guò)濾 用DMSO稀釋?zhuān)涑?mg/ml，再10倍的稀釋?zhuān)梢杂门囵B(yǎng)液稀釋到10負(fù)n次方）這樣千分之一的DMSO對(duì)細(xì)胞的毒性很小，不用過(guò)濾。 后面的稀釋液用無(wú)菌的就可以了。 你的意思是，用dmso直接配成1mg/ml的儲(chǔ)備液，在用培養(yǎng)基稀釋 不過(guò)濾也能保證無(wú)菌嗎？ 是的。因?yàn)镈MSO是劇毒所以細(xì)菌之類(lèi)的在里面長(zhǎng)不起來(lái)。 請(qǐng)問(wèn)： 1）用DMSO稀釋?zhuān)涑?mg/ml，（這時(shí)DMSO濃度是100%），再10倍的稀釋?zhuān)ㄟ@時(shí)是10%），取20ul到20ul 中，（這時(shí)是1%）吧？還是再同樣稀釋到 0.1%？ 2）所有的有機(jī)提取物或說(shuō)是不溶于水的物質(zhì)都可以用DMSO 溶嗎？如果是按上述方法逐級(jí)稀釋的話(huà)，藥物濃度也就跟著下來(lái)了，初篩的話(huà)藥濃要達(dá)多少的？是終濃度是100ug/ml嗎？可以直接加1mg的藥然后加100ul的DMSO，再加900ul 的稀釋液進(jìn)行稀釋嗎？這樣終濃也是1%的，而且藥濃是100ug/ml，這樣可以嗎 ？ 3）稀釋液是用培養(yǎng)基是吧，有人也說(shuō)可以用PBS緩沖液 或三蒸水，我也不知道大家用的都是什么的，請(qǐng)指教 4）有機(jī)溶劑的溶解可以用別的嗎？不過(guò)查閱相關(guān)文獻(xiàn)，好象對(duì)于不同細(xì)胞株，不同有機(jī)試劑對(duì)他們的影響不近相同，不知道有沒(méi)有比較好的通用的溶劑和濃度能滿(mǎn)足不同的藥物溶解和對(duì)細(xì)胞毒害作用小的要求。 多謝，多謝。 DMSO不太行的話(huà)可以試試超聲,我們這里就是這么做的 看看有機(jī)溶劑，比如說(shuō)乙醇，適不適合你的藥物， 1 如果是在sigma 買(mǎi)的藥：那里會(huì)有關(guān)于要物的詳細(xì)信息。如果不容水通常用DMSO 或者乙醇溶。 如果自己合成的藥物最好自己嘗試了。 一般不容水的藥物在DMSO 和乙醇中的溶解量是4mg/ml 左右，配藥的濃度 不要太高度。所以你配藥時(shí)可配制10－2 ，10－3MOL/L 的母液。 2 具體操作：先確定你要配制母液的濃度：如 10－3 M。稱(chēng)藥后加DMSO溶解就可以了。 稱(chēng)取2到5mg 的藥物。 需要加入的DMSO的體積ml=藥物的質(zhì)量mg× 10－3，再除以藥物的分子量。 3 藥物配好后混勻，必須達(dá)到透明的程度。10ul 分裝，高濃度分裝比較好。 4 藥物的稀釋10ul 加990ul稀釋液,得到10－5M. 取100ul ,加900ul.得到藥物的濃度是10－6M. 依次類(lèi)推，直到你需要的濃度。 5 稀釋液最好是無(wú)血清的培養(yǎng)基。 6 DMSO 配好的藥物，如果短時(shí)間給藥2h，不用過(guò)濾消毒。長(zhǎng)時(shí)間給藥24h，要考慮到無(wú)菌，保險(xiǎn)起見(jiàn)，加藥前要過(guò)濾。最好是算好你要用的藥量，一次過(guò)濾的多一點(diǎn)。 |
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