前  言

一、專屬性

專屬性系指在其他成分（如雜質(zhì)、輔料等）可能存在下，采用的分析方法能正確測定出被測物的能力。專屬性是大多數(shù)分析方法中最重要的指標(biāo)，是建立分析方法首先要考慮的問題。色譜法中常見的專屬性考察指標(biāo)為分離度。

在分析方法驗證過程中，有很多方法來考察專屬性：

（1）分離度考察（各起始物料、中間體、副產(chǎn)物、降解產(chǎn)物、主成分、空白輔料、溶劑），對于有關(guān)物質(zhì)而言，已知雜質(zhì)或降解產(chǎn)物應(yīng)加入到新配制的含活性成分的溶液中，確保與被測定峰完全分離，主峰與相鄰雜質(zhì)，以及雜質(zhì)與雜質(zhì)之間的分離度應(yīng)大于1.5（方法開發(fā)時可以規(guī)定大于2），有時在標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定采用相對保留時間的方法確定某個雜質(zhì)，那么在專屬性考察中應(yīng)統(tǒng)計相對保留時間，并注意在其他驗證項目中也進(jìn)行統(tǒng)計。

（2）降解試驗（光照、高溫、高濕、酸堿水解、氧化）或加速試驗中的樣品。

（3）采用PDA（或DAD）檢測器、質(zhì)譜檢測器（MS）進(jìn)行峰純度檢查。

（4）改變方法中的某個條件進(jìn)行驗證（如在等度洗脫后增加有機(jī)相比例，考察有無未洗脫下來的新雜質(zhì)；采用CAD檢測器等考察無UV吸收的其他雜質(zhì)峰）。

（5）考察未精制的粗品，并與最終精制過的成品進(jìn)行雜質(zhì)譜對比，根據(jù)粗品中各成分的分離度和樣品中可能出現(xiàn)雜質(zhì)來優(yōu)化色譜參數(shù)。

（6）代表性制劑樣品（制劑工藝中可能新增其他雜質(zhì)）。

上述方法中，值得討論的是降解試驗。指導(dǎo)原則中沒有關(guān)于降解條件的特別規(guī)定，因此做法各不相同。通常，原料藥的強(qiáng)制降解試驗包括液態(tài)的和固態(tài)的情況（應(yīng)包括酸/堿水解，高溫，高濕，氧化和光照），僅通過原料藥的溶液或固體的降解一般無法準(zhǔn)確推斷制劑中藥物的降解情況，因為制劑中的非活性成分（輔料）也可能與原料藥反應(yīng)或催化降解反應(yīng)。對于制劑，常用試驗條件為高溫、高濕和光照。制劑的降解很大程度決定于該制劑是溶液還是固體。對于固體制劑，主要試驗是高溫、高濕和光照降解，最常見的反應(yīng)類型是水和原料藥的反應(yīng)，因此高溫和高濕組合試驗也很關(guān)鍵。制劑降解中需同時進(jìn)行空白輔料的降解試驗。

降解程度通常是使主成分有5%~20%的降解（主峰剩余80%~95%），盡量不要讓降解超過20%，如果超過20%，則應(yīng)改變降解強(qiáng)度和/或時間。避免使用高濃度或劇烈的破壞條件，盡量使用低濃度、長時間的條件進(jìn)行降解。因為當(dāng)使用劇烈條件時可能出現(xiàn)次級降解，藥物的降解機(jī)理可能會發(fā)生改變。

酸降解：酸降解可以通過在樣品溶液中或固體（原料藥或制劑）中加入0.1mol/L鹽酸溶液進(jìn)行，條件可以在室溫或60℃條件下最長放置3天。

堿降解：堿降解可以按照酸降解的方式進(jìn)行，如0.1mol/L氫氧化鈉，二者均應(yīng)采用相應(yīng)的酸堿溶液進(jìn)行中和。

氧化降解：親核氧化反應(yīng)可以在樣品溶液中或固體（原料藥或制劑）中加入稀過氧化氫溶液（如3%），在室溫下反應(yīng)24h進(jìn)行，可能產(chǎn)生N-氧化物或亞砜雜質(zhì)。自由基氧化可以使用偶氮二異丁腈（Azobisisobutyronitrile，AIBN）來進(jìn)行研究，在40℃下反應(yīng)1-3天。應(yīng)根據(jù)藥物的氧化降解機(jī)理選擇適當(dāng)?shù)难趸瘎?/p>

高溫降解：高溫降解試驗可以采用樣品溶液中或固體（原料藥或制劑）在高溫下進(jìn)行，典型條件是在60°C 進(jìn)行24-48 h, 基于貯藏條件，其他室溫以上的條件也可以采用。

光照降解：高溫降解試驗可以采用樣品溶液中或固體（原料藥或制劑）,試驗條件可根據(jù)ICHQ1B中的光源應(yīng)包括可見光和紫外光。

如果化合物難溶于水，可加入其他助溶劑使其在鹽酸或氫氧化鈉溶液中或過氧化氫溶液中溶解。助溶劑的選擇應(yīng)基于藥物的結(jié)構(gòu)。兩種最常用的共溶劑為乙腈和甲醇。但應(yīng)當(dāng)注意的是，由于受諸多因素的影響，通過助溶劑增加溶解度并非都能加速降解。選擇合適的共溶劑時應(yīng)特別關(guān)注藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。應(yīng)能夠識別藥物結(jié)構(gòu)中易反應(yīng)的化學(xué)位點，切勿選擇能與藥物發(fā)生反應(yīng)的共溶劑。例如，當(dāng)藥物結(jié)構(gòu)中含有羧酸、酯鍵、酰胺鍵、芳香胺或羥基時，應(yīng)避免使用甲醇和其他醇類作為共溶劑進(jìn)行酸降解試驗。這樣會避免因藥物與甲醇或其他醇類反應(yīng)導(dǎo)致的不必要的研究工作。另外，只有當(dāng)乙腈比例為20%或更低時才可與1N NaOH溶液混合，NaOH濃度降低至0.1N時可以使用更高比例的乙腈作為共溶劑。乙腈是最常用的共溶劑。

對于制劑而言，高溫、光、濕（RH70%或80%）、高溫+高濕是很重要的，因為這些條件更能夠模擬今后制劑中遇到的實際情況，發(fā)現(xiàn)這些條件下產(chǎn)生的雜質(zhì)可以提前做出是否需要增加這些雜質(zhì)研究的判斷。例如，作者曾在高溫高濕條件下發(fā)現(xiàn)有三個新增雜質(zhì)，對過期的參比制劑以及經(jīng)過加速試驗的參比制劑進(jìn)行檢測時發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)生的雜質(zhì)與高溫高濕條件一致。

目標(biāo)化合物色譜峰的峰純度是專屬性的一個重要考察指標(biāo)，使用光譜檢測器進(jìn)行專屬性評價的原理見下圖，以色譜法和紫外-可見二極管陣列檢測器為例。圖中顯示了一個專屬性色譜方法和一個非專屬性色譜方法。兩個色譜峰看起來非常相似。從峰形來看，無法明顯看出該色譜峰中包含一個或幾個化合物。這兩個例子中，分別在色譜峰的上行和下行處查看其UV 光譜圖，歸一化后進(jìn)行比較。左例中，光譜圖是相同的，表明該色譜峰中只有一個化合物，或者說該色譜峰是光譜純的。右例中，兩個UV 光譜圖不同，由此證明該色譜峰顯然不純。現(xiàn)在二極管陣列檢測器能夠?qū)庾V圖進(jìn)行自動比較，進(jìn)行峰純度評價。

當(dāng)共洗脫化合物的光譜圖非常接近時，紫外-可見二極管陣列檢測器就有其局限性，這種情況下，最好為HPLC 配一個質(zhì)譜檢測器。質(zhì)譜通常比紫外光譜專屬性更強(qiáng)，因此常用于色譜的選擇性評價。一個HPLC 與質(zhì)譜配合使用的例子見下圖。對于4.86 分鐘洗脫的色譜峰，在不同部位采集的質(zhì)譜圖不同，顯示該色譜峰不純。

如果文獻(xiàn)報道藥物在各條件下都比較穩(wěn)定，并且在所設(shè)計的劇烈條件下降解仍達(dá)不到5%或10%，則沒有必要再繼續(xù)進(jìn)行降解?？傊?，降解試驗不應(yīng)為了降解而降解，最好能夠模擬制劑加速條件或以后可能遇到的劇烈條件，即具有一定的穩(wěn)定性指示作用是最好的。如某藥物對光敏感，那么在進(jìn)行降解試驗是應(yīng)考察固體和溶液哪個更敏感、對什么光敏感、采用的避光措施能否有效避光等。

在經(jīng)過定位研究及降解試驗研究后，一旦證明方法的專屬性符合要求，那么此時方法中的色譜柱、流動相組成、流速、柱溫、檢測波長就可以基本確定下來，以后可以在此基礎(chǔ)上繼續(xù)進(jìn)行摸索和優(yōu)化。值得注意的是，有時色譜圖中顯示相鄰兩個色譜峰的分離度為1.5，雖然數(shù)據(jù)上符合要求，但放大觀察后可能會發(fā)現(xiàn)二者并不能完全分離，此時最好繼續(xù)優(yōu)化條件使雜質(zhì)的分離度大于2，以免后期出現(xiàn)問題。

二、準(zhǔn)確度

準(zhǔn)確度系指所建立方法測定的結(jié)果與真實值或參比值接近的程度，一般用回收率（%）表示?；厥章蕬?yīng)在規(guī)定的線性范圍內(nèi)試驗。

在本指導(dǎo)原則中，準(zhǔn)確度的數(shù)據(jù)中有一定變化，例如將同一濃度（相當(dāng)于100%濃度水平）6份供試品的方法刪掉了，只保留了3種不同濃度，每種濃度分別制備3份溶液，共9份樣品的測定方法。

對于化學(xué)藥，將配制方法中的推薦比例也刪掉了。

樣品中待測成分含量和回收率限度關(guān)系可參考下表，在基質(zhì)復(fù)雜、組分含量低于0.01%及多成分等分析中，回收率限度可適當(dāng)放寬。

在方法學(xué)驗證中，對于原料藥的含量測定回收率而言，應(yīng)采用已知含量（真值）的對照品配制三種不同濃度，每個濃度三份，共九份進(jìn)行測定，九份結(jié)果的平均值作為最終結(jié)果（測定值），并將其與其他方法測得的結(jié)果或與對照品報告單上的結(jié)果進(jìn)行比較，如果基本一致，說明方法準(zhǔn)確性很高。對于原料藥中的雜質(zhì)而言，可在原料藥中加入50%限度、100%限度、150%限度、200%限度的雜質(zhì)對照品，每個濃度配制三份，進(jìn)行評價。

對于制劑含量測定而言，可以在處方量空白輔料中加入不同量的對照品，例如正常分析中被測物含量的80%、100%、120%，對于溶出度、含量均勻度、雜質(zhì)測定而言，可以在空白輔料或樣品中加入一定比例的對照品或雜質(zhì)對照品，濃度范圍包括藥典中推薦的范圍，對于雜質(zhì)而言一般為50%限度、100%限度、150%限度、200%限度，根據(jù)測定總量、加入量和樣品中原有量，計算回收率百分比。

雜質(zhì)回收率的計算時，如果最終標(biāo)準(zhǔn)是加校正因子的主成分自身對照法，應(yīng)采用確定的方法計算回收率。同時，可以驗證外標(biāo)法和加校正因子的主成分自身對照法兩種方法的測定結(jié)果是否一致，并將這兩種方法的計算結(jié)果均列入方法學(xué)驗證資料中。

如不能得到制劑輔料的全部組分，可向待測制劑中加入已知量的被測物進(jìn)行測定。用實測值與供試品中含有量之差，除以加入對照品量計算回收率。但應(yīng)注意，在加樣回收率試驗中須注意對照品的加入量與供試品中被測成分含有量之和必須在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍之內(nèi)，加入的對照品量要適當(dāng)，過小則引起較大的相對誤差，過大則干擾成分相對減少，真實性差。

在測定雜質(zhì)回收率時，通常是配制一份雜質(zhì)母液，然后在供試品中按設(shè)計的百分比濃度加入，如果雜質(zhì)的線性與回收率先后在這臺儀器上進(jìn)行，那么可將線性試驗中雜質(zhì)的峰面積與回收率試驗中雜質(zhì)的峰面積進(jìn)行對比，直觀考察基質(zhì)效應(yīng)（輔料影響）、以及溶液制備過程對準(zhǔn)確度的影響，如有影響，應(yīng)分析原因，提高回收率。

三、精密度

精密度系指在規(guī)定的條件下，同一份均勻供試品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。在相同條件下，由同一個分析人員測定所得結(jié)果的精密度稱為重復(fù)性；在同一個實驗室，不同時間由不同分析人員用不同設(shè)備測定結(jié)果之間的精密度，稱為中間精密度；在不同實驗室由不同分析人員測定結(jié)果之間的精密度，稱為重現(xiàn)性。含量測定和雜質(zhì)的定量測定應(yīng)考察方法的精密度。

重復(fù)性試驗具體做法為：在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度（分析方法擬定的樣品測定濃度，相當(dāng)于100%濃度水平）的供試品，用至少測定6份的結(jié)果進(jìn)行評價；或設(shè)計3種不同濃度，每種濃度分別制備3份供試品溶液進(jìn)行測定，用9份樣品的測定結(jié)果進(jìn)行評價。

對含量測定而言，通常重復(fù)性按照第一種方法配制6份相同濃度的供試品溶液，由一個分析人員在盡可能相同的條件下進(jìn)行測試。中間精密度是由不同人員，在不同時間按照重復(fù)性的方法采用同一批樣品配制6份相同濃度的供試品溶液，最后統(tǒng)計兩次共12份含量數(shù)據(jù)的相對標(biāo)準(zhǔn)差。重復(fù)性和中間精密度應(yīng)符合下表規(guī)定。

對于有關(guān)物質(zhì)的重復(fù)性和中間精密度考察，除了應(yīng)統(tǒng)計上表中規(guī)定的RSD外，也應(yīng)考慮各樣品的雜質(zhì)數(shù)量、雜質(zhì)總量，有時雜質(zhì)檢出很小時會統(tǒng)計雜質(zhì)的極差，如果極差小于0.02%（或限度的20%）也可以認(rèn)為無明顯差異，說明方法精密度良好。

重現(xiàn)性是考察不同實驗室間的精密度，可以在方法轉(zhuǎn)移中進(jìn)行評估。

值得注意的是，較高的精密度往往受到玻璃儀器、轉(zhuǎn)移、稱量、稀釋、過濾等因素的制約，因此過程中應(yīng)特別注意規(guī)范操作。

四、檢測限和定量限

檢測限系指試樣中被測物能被檢測出的最低量。檢測限沒有定量意義。定量限系指試樣中被測物能被定量測定的最低量，其測定結(jié)果應(yīng)符合準(zhǔn)確度和精密度要求。對于雜質(zhì)測定應(yīng)確定方法的定量限。

指導(dǎo)原則中規(guī)定了三種方法測定檢測限和定量限：

（1）直觀法：用已知濃度的被測物，試驗出能被可靠地檢出（或定量測定）的最低濃度或量。

（2）信噪比法：用于能顯示基線噪聲的分析方法，即將已知低濃度試樣檢出的信號與空白樣品測出的信號進(jìn)行比較，計算出能被可靠地檢出（或定量）的被測物質(zhì)最低濃度或量。一般以信噪比3:1或2:1時（或10:1）相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測限（或定量限）。

（3）基于響應(yīng)值標(biāo)準(zhǔn)偏差和標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率法。按照LOD=3.3δ/S或LOQ=10δ/S公式計算，式中LOD為檢測限，LOQ為定量限，δ為響應(yīng)值的偏差，S為標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率。其中δ可以通過以下方法獲得：①測定空白值的標(biāo)準(zhǔn)偏差；②采用標(biāo)準(zhǔn)曲線的剩余標(biāo)準(zhǔn)偏差或是截距的標(biāo)準(zhǔn)偏差來代替。

方法學(xué)驗證中，應(yīng)在申報資料中說明是采用上述何種方法來測定檢測限或定量限的。

對于目測法而言，需要提供逐級稀釋的圖譜，并說明稀釋過程。如下圖采用采用初始濃度0.4ng/ml逐級稀釋，最后目測觀察0.10ng/ml的濃度相當(dāng)于檢測限濃度。

檢測限和定量限常采用信噪比法測定。該計算方法下的檢測限與定量限是通過對照品逐級稀釋的方法獲得的，沒有考慮任何樣品制備步驟的影響，因此其值往往比分析方法本身的實際檢測限與定量限低，而且每臺儀器也不一樣，因此信噪比法是用來考察儀器本身性能的，與方法本身的檢測限或定量限還是不一樣的。信噪比法受到的影響因素比較多，例如所用色譜柱的柱效、檢測器的氘燈壽命等。例如，下圖中峰形尖銳的信噪比高，s/n=11，此時檢測限和定量限都較低。

盡管信噪比法有諸多問題，但目前仍是方法學(xué)驗證中最常用的計算方法。有時，為了保證方法的靈敏度，有時可采用靈敏度較差的PDA/DAD檢測器進(jìn)行檢測限和定量限的考察。

通常檢測限應(yīng)低于限度的1/30，定量限應(yīng)低于限度的1/10，如果達(dá)不到這一要求，可適當(dāng)放寬，只要規(guī)定定量限應(yīng)比ICH規(guī)定的雜質(zhì)的報告限低即可（例如50%報告限）。

由于靈敏度受儀器、色譜柱、試劑、泵系統(tǒng)、檢測器等的影響很大，因此為了保證方法的檢測能力，有些藥物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定了靈敏度溶液的信噪比作為系統(tǒng)適用性要求來考察整個色譜系統(tǒng)的靈敏度，相信這種方法以后會應(yīng)用越來越多。

在指導(dǎo)原則中還有一句話很重要：“上述方法獲得的檢測限和定量限數(shù)據(jù)須用含量相近的樣品進(jìn)行驗證，應(yīng)附測試圖譜，說明測試過程和定量限結(jié)果，包括準(zhǔn)確度和精密度驗證數(shù)據(jù)?！?/strong>如何進(jìn)行檢測限和定量限的驗證呢？常見的做法是采用雜質(zhì)加標(biāo)的方法進(jìn)行驗證，例如在供試品溶液中加入相當(dāng)于檢測限或定量限濃度的雜質(zhì)，考察加入后的色譜圖中信噪比是否符合要求。定量限的精密度驗證目前基本都做到了，常采用配制6份定量限濃度的溶液，所測6份溶液雜質(zhì)峰保留時間的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%，峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于5.0%的方法進(jìn)行評價。有時也進(jìn)行定量限濃度的準(zhǔn)確度驗證，可接受限度可參考上述準(zhǔn)確度項下的規(guī)定，有時也可以適當(dāng)放寬。

對于滴定方法而言，不必驗證方法的檢測限和定量限，而應(yīng)更重視方法的準(zhǔn)確性、精密度和專屬性。

五、線性

線性系指在設(shè)計的范圍內(nèi)，測定結(jié)果與試樣中被測物濃度直接呈比例關(guān)系的程度。在9101分析方法驗證指導(dǎo)原則中規(guī)定了兩種測定方法：

（1）同一對照品溶液稀釋

（2）分別配制對照品溶液

并規(guī)定至少采用5種不同濃度進(jìn)行試驗，以響應(yīng)信號作為與被測物濃度的函數(shù)作圖，首先觀察是否呈線性，再用最小二乘法進(jìn)行線性回歸。用于結(jié)果計算的線性回歸方程其截距不得明顯偏離零點。如果得到一個顯著的非零截距，應(yīng)證明其對方法準(zhǔn)確度沒有影響。對于化學(xué)藥的含量測定，線性試驗可接受范圍為：回歸線的相關(guān)系數(shù)（R）不得小于0.998，Y軸截距應(yīng)在100%響應(yīng)值的2%以內(nèi)，響應(yīng)因子的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。對于有關(guān)物質(zhì)測定，線性試驗可接受范圍為：回歸線的相關(guān)系數(shù)（R）不得小于0.990，Y軸截距應(yīng)在100%響應(yīng)值的25%以內(nèi)，響應(yīng)因子的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于10%。

方法（1）采用同一對照品溶液（貯備液）進(jìn)行系列稀釋，與分別配制幾種濃度的對照品分別進(jìn)樣相比能夠減少誤差，因此是做線性的首選方法。

在進(jìn)行雜質(zhì)研究中，經(jīng)常要測定校正因子校正因子，目前首選方法是標(biāo)準(zhǔn)曲線法：精密稱取雜質(zhì)對照品和主成分對照品，分別制備系列溶液（涵蓋定量限、標(biāo)準(zhǔn)限度），分別進(jìn)樣后，按最小二乘法以進(jìn)樣量對響應(yīng)值（峰面積等）進(jìn)行線性回歸，求得兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線，兩曲線斜率之比即為校正因子。由于從定量限到標(biāo)準(zhǔn)限度往往超過一個或多個數(shù)量級，此時通過最小二乘法存在一定的缺陷，高濃度對結(jié)果的影響很大，分段進(jìn)行計算時，往往低濃度不呈線性。因此，此時藥典中規(guī)定的首先觀察就很有意義，如果明顯不呈線性，計算出的結(jié)果也是不對的。除了觀察之外，也可以采用低濃度點的峰面積對濃度計算單濃度點的校正因子，如果真的呈線性，那么每個點的校正因子應(yīng)基本一致，如果差異很大說明是“假線性”。上述內(nèi)容可以用下圖來比較直觀的說明。

校正因子的驗證試驗很重要，在測定時應(yīng)至少采用上述線性方法重復(fù)測定三次校正因子，比較三次結(jié)果的一致性。如參考了藥典標(biāo)準(zhǔn)條件，應(yīng)將實測的校正因子與藥典質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的校正因子進(jìn)行對比。

六、范圍

范圍系指分析方法能達(dá)到精密度、準(zhǔn)確度和線性要求時高低限濃度或量的區(qū)間。范圍應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用及其線性、準(zhǔn)確度、精密度結(jié)果和要求確定。

范圍推薦值

七、耐用性

耐用性系指在測定條件有小的變動時，測定結(jié)果不受影響的承受程度，為所建立的方法用于常規(guī)檢驗提供依據(jù)。

耐用性通常對應(yīng)ICHQ2指導(dǎo)原則中的Robustness，這種改變是微小的、故意對方法本身參數(shù)進(jìn)行的改變，考察對結(jié)果的影響，在方法開發(fā)階段、預(yù)驗證階段就應(yīng)進(jìn)行考察。如不同流動相組成、不同品牌色譜柱、不同檢測波長、不同pH、不同柱溫、不同流速、不同進(jìn)樣口和檢測器溫度等。常見的改變包括：考察流動相比例變化±5％、流動相pH值變化±0.2、柱溫變化±5℃、檢測波長變化±2nm、流速相對值變化±20%以及采用三根不同品牌的色譜柱進(jìn)行測定，考察系統(tǒng)適用性和樣品測定結(jié)果的變化。

此外，耐用性還應(yīng)包括Ruggedness，即方法在實際應(yīng)用條件下結(jié)果的重現(xiàn)性。這些影響因素包括不同分析人員、不同實驗室、相同廠家相同品牌不同批號色譜柱、新色譜柱、不同品牌儀器、不同廠家的化學(xué)試劑等。這些變量在以后方法使用中更為重要，因此也應(yīng)該在方法開發(fā)和驗證階段就重視。在方法轉(zhuǎn)移階段，方法的ruggedness應(yīng)該特別關(guān)注，并與同批樣品之前的結(jié)果進(jìn)行對比。在后期方法使用的過程中，ruggedness會經(jīng)歷大量的檢驗來評價，應(yīng)注意問題匯總。例如，如果發(fā)現(xiàn)相同品牌不同批號的色譜柱有影響，就應(yīng)該保存好這些“好”的色譜柱，多從廠家采購相同批號的色譜柱，以避免以后可能出現(xiàn)的問題。

最后，溶液的穩(wěn)定性、樣品前處理方法、流動相的穩(wěn)定性等也應(yīng)進(jìn)行考察。通常對照品溶液、供試品溶液都要考察溶液穩(wěn)定性，一般而言，24小時內(nèi)的溶液穩(wěn)定性是需要考察的。對于室溫下不穩(wěn)定的，可以選擇冰箱內(nèi)保存（2-8℃）。對于含THF的流動相容易被氧化，應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用。某些磷酸鹽或醋酸鹽在夏天時會因為微生物生長，因此應(yīng)不宜使用過長。

八、系統(tǒng)適用性試驗

《中國藥典》2020年版編制大綱要求“加強(qiáng)方法中系統(tǒng)適用性試驗研究并在標(biāo)準(zhǔn)中予以體現(xiàn)，提高方法的重現(xiàn)性和準(zhǔn)確性”，但在本通則征求意見稿中沒有明確規(guī)定需要進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗研究和驗證，僅在耐用性項下規(guī)定：測定條件小的變動應(yīng)能滿足系統(tǒng)適用性試驗要求，以確保方法的可靠性。目前，在方法開發(fā)與驗證的過程中，存在著對系統(tǒng)適用性試驗認(rèn)識和研究不足、缺少重視的情況，應(yīng)引起重視。關(guān)于“系統(tǒng)適用性試驗研究”的一些思考一文可結(jié)合本文一起閱讀。

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