動(dòng)物組織

1. 選取新鮮組織，剔除無(wú)關(guān)的干擾組織（血管、脂肪、結(jié)締組織等）；

2. PBS/生理鹽水漂洗，去除血漬和污染物，用無(wú)塵吸水紙吸去表面液體；

3. 剪切成邊長(zhǎng) 0.5 cm 小塊或 100 mg 左右小塊；

4. 
   

   液氮速凍5 min以上，并于-80℃保存。
   

   
   

常規(guī)動(dòng)物組織（腦、心、肝、脾、肺、腎、肌肉、皮膚等）：

定量蛋白質(zhì)組-送樣量＞200 mg；

修飾蛋白質(zhì)組-送樣量＞500 mg。

植物組織

1. 地上部分在樣本離體前用無(wú)菌水清洗雜質(zhì)，水干后采集樣本；

2. 地下部分在樣本離體后，用預(yù)冷的PBS清洗雜質(zhì)，無(wú)塵紙吸干后采集樣本；

3. 去除干擾部分（非目標(biāo)組織及衰老、霉變等）；

4. 剪切成小塊，錫紙包裹或放入凍存管中；

5. 液氮速凍5 min以上，并于-80℃保存。

常規(guī)植物組織（幼嫩的根、葉、花、愈傷組織等）：

定量蛋白質(zhì)組-送樣量＞1g；

修飾蛋白質(zhì)組-送樣量＞2 g。

細(xì)胞樣品

懸浮細(xì)胞

• 培養(yǎng)至2-5×10⁵/ml，收集到15 ml離心管中，4℃，400 g-1000 g離心5-10 min，去上清；

• 用10 ml PBS洗3次；

• 1 ml PBS重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)移到新的1.5 ml離心管；

• 同等條件離心，將上清去除干凈；

• PBS重懸，液氮速凍，并于-80℃保存

貼壁細(xì)胞

• 覆蓋度70-90%，去培養(yǎng)基培養(yǎng)皿用10 ml PBS洗3次，培養(yǎng)皿倒扣，將液體控干；

• 培養(yǎng)皿置于冰上，胰蛋白酶消化，PBS懸浮細(xì)胞；

• 收集到15 ml離心管中，4℃，400 g-1000 g離心5-10 min，去PBS；

• 1 ml PBS重懸后轉(zhuǎn)移到新的1.5 ml離心管；

• 同等條件離心，將上清去除干凈；

• PBS重懸，液氮速凍，并于-80℃保存。

1. 懸浮/貼壁細(xì)胞，定量蛋白質(zhì)組-送樣量＞1×10⁷個(gè)細(xì)胞或體積＞50ul細(xì)胞沉淀；

2. 磷酸化蛋白質(zhì)組-送樣量＞5×10⁷個(gè)細(xì)胞或體積＞200ul細(xì)胞沉淀；

3. 乙酰化、泛素化蛋白質(zhì)組＞1×10⁸個(gè)細(xì)胞或體積＞500ul細(xì)胞沉淀。

血液樣品

血漿樣本

• EDTA抗凝劑和蛋白酶抑制劑的血常規(guī)管采集血液；

• 輕輕地上下顛倒混勻 8-10 次；

• 立即4℃，1600 g離心 10 min；

• 將血漿轉(zhuǎn)移到離心管中，加入蛋白酶抑制劑，混勻，瞬時(shí)離心。

血清樣本

• 真空采血管收集血液；

• 輕輕地上下顛倒混勻5-6 次；

• 4℃，靜置15-30 min；

• 4℃，1600 g離心10 min；

• 上層淡黃色血清轉(zhuǎn)移到離心管中，加入蛋白酶抑制劑，混勻，瞬時(shí)離心。

血漿/血清樣本：

定量蛋白質(zhì)組-送樣量＞500 ul。

微生物樣品

• 離心法或其他方法分離菌和培養(yǎng)基；

• 收集菌體到15 ml離心管，用10 ml PBS洗3次；

• 用1 ml PBS 重懸菌體，轉(zhuǎn)移到1.5 ml離心管中離心，去上清，記錄菌的濕重或體積；

• PBS重懸，每管100 ul分裝，液氮速凍，并于-80℃保存。

微生物菌體：

定量蛋白質(zhì)組-送樣量濕重＞100mg或體積＞100ul；

修飾蛋白質(zhì)組-送樣量濕重＞300mg或體積＞300ul。

膠條樣本

膠點(diǎn)膠條

膠點(diǎn)/膠條或者泳道皆可，建議考馬斯亮藍(lán)染色（條帶清晰，無(wú)降解）。

IP / Co-IP / Pull-down樣本

蛋白洗脫液蛋白總量＞5ug，蛋白溶液進(jìn)行SDS－PAGE電泳，下方兩種電泳方式任選其一即可。

• 蛋白洗脫液，分離膠5cm（不含濃縮膠的SDS－PAGE），切5cm膠條，于1.5ml離心管中。

• 蛋白洗脫液，SDS－PAGE標(biāo)準(zhǔn)的膠，切下目標(biāo)條帶，放入1.5ml離心管中.