模擬試驗(yàn)是一個(gè)系統(tǒng)性工程，通過模擬無菌生產(chǎn)工藝全過程，證實(shí)生產(chǎn)過程中無菌保障措施的有效性。應(yīng)從以下幾方面關(guān)注模擬試驗(yàn)的設(shè)計(jì)與實(shí)施：

在無菌工藝模擬試驗(yàn)之前應(yīng)確認(rèn)與無菌工藝相關(guān)的支持性系統(tǒng)和滅菌系統(tǒng)等驗(yàn)證已完成，并達(dá)到了可接受的標(biāo)準(zhǔn)。

1、工藝設(shè)備、公用系統(tǒng)和輔助設(shè)施已按照預(yù)期完成了設(shè)計(jì)、安裝、運(yùn)行確認(rèn)及與無菌生產(chǎn)有關(guān)的性能確認(rèn)。

2、已對(duì)工藝設(shè)備、公用系統(tǒng)、輔助設(shè)施，如高壓滅菌設(shè)備、配液罐、隧道烘箱等的滅菌方法完成了相應(yīng)的驗(yàn)證。物料及廠房、設(shè)施所使用消毒劑及消毒方式完成了相關(guān)的驗(yàn)證。

3、藥液及產(chǎn)品接觸的氣體、設(shè)備組件、容器、器具等滅菌工藝或除菌工藝的驗(yàn)證已經(jīng)完成。

4、無菌生產(chǎn)區(qū)域的氣流及環(huán)境達(dá)到了設(shè)計(jì)要求，并能穩(wěn)定運(yùn)行。但不得采用對(duì)環(huán)境或者器具進(jìn)行過度滅菌或消毒的方式提高無菌保證水平。

5、根據(jù)無菌生產(chǎn)工藝要求建立了相關(guān)受控操作文件。

6、參與無菌工藝模擬試驗(yàn)的人員接受了藥品GMP、無菌更衣、無菌操作、微生物知識(shí)的培訓(xùn)以及通過實(shí)施模擬試驗(yàn)資格的確認(rèn)。

7、無菌潔凈區(qū)的全部人員通過了更衣程序的確認(rèn)，并采用文件或其他措施，確認(rèn)了每位參與者可進(jìn)入的區(qū)域和其所允許的無菌操作項(xiàng)目。

模擬試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)應(yīng)結(jié)合無菌生產(chǎn)工藝，盡量與實(shí)際無菌操作過程保持一致，以求試驗(yàn)結(jié)果真實(shí)反映生產(chǎn)過程的無菌保障水平。

1、無菌生產(chǎn)工藝的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

無菌生產(chǎn)工藝的設(shè)計(jì)基于對(duì)產(chǎn)品特性、工藝技術(shù)和無菌保證措施的認(rèn)知和經(jīng)驗(yàn)的累積。設(shè)計(jì)模擬試驗(yàn)方案前應(yīng)對(duì)無菌生產(chǎn)過程開展系統(tǒng)性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，以充分識(shí)別無菌生產(chǎn)過程中潛在風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)。

2、模擬試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)時(shí)，應(yīng)重點(diǎn)考察和評(píng)估高風(fēng)險(xiǎn)的無菌操作過程。無菌生產(chǎn)工藝的暴露操作是影響最終產(chǎn)品無菌特性的重要環(huán)節(jié)，如設(shè)備（或管道）的無菌連接、無菌容器的轉(zhuǎn)運(yùn)和更換、灌裝等關(guān)鍵操作。模擬試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)應(yīng)考察以上過程無菌保證措施的有效性。

3、證實(shí)人員的無菌操作能力能夠滿足無菌生產(chǎn)要求，是實(shí)施模擬試驗(yàn)的目的之一。進(jìn)行模擬試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)時(shí)，應(yīng)結(jié)合工藝過程中的暴露操作環(huán)節(jié)，重點(diǎn)考察有人員參與的關(guān)鍵操作，評(píng)價(jià)人員無菌操作素養(yǎng)和防護(hù)措施的可靠性。

1、模擬介質(zhì)的選擇

應(yīng)結(jié)合被模擬產(chǎn)品的特點(diǎn)以及模擬介質(zhì)的可過濾性、澄清度、滅菌方式等選擇合適的模擬介質(zhì)。不應(yīng)選擇具有抑菌性的模擬介質(zhì)，以確保模擬試驗(yàn)結(jié)果的可信度。通?？刹捎玫哪M介質(zhì)包括促進(jìn)微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基和安慰劑。

2、培養(yǎng)基的選擇

胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（TSB）是一種廣譜性培養(yǎng)基，特別對(duì)無菌工藝環(huán)境中源自人體的細(xì)菌、芽孢和真菌有良好的促生長(zhǎng)效果，是無菌工藝模擬試驗(yàn)常用的培養(yǎng)基。

如果產(chǎn)品需充入惰性氣體、儲(chǔ)存在無氧條件，無菌操作在嚴(yán)格的厭氧環(huán)境中進(jìn)行時(shí)（即氧氣濃度低于0.1%）。應(yīng)評(píng)估是否采用厭氧培養(yǎng)基，如硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基（FTM）或其他適宜的培養(yǎng)基。在厭氧的無菌工藝環(huán)境監(jiān)控中反復(fù)發(fā)現(xiàn)厭氧微生物或在產(chǎn)品無菌檢查中發(fā)現(xiàn)厭氧微生物時(shí)，需評(píng)估增加厭氧培養(yǎng)基。

用于模擬抑菌性產(chǎn)品的培養(yǎng)基，如有必要需評(píng)估抑菌性產(chǎn)品殘存對(duì)其促生長(zhǎng)能力及模擬試驗(yàn)結(jié)果的影響。

對(duì)于包含動(dòng)物來源成分的培養(yǎng)基，應(yīng)考慮培養(yǎng)基引入外源性病毒污染的風(fēng)險(xiǎn)，如BSE（可傳染性海綿腦?。?TSE（瘋牛?。┑娘L(fēng)險(xiǎn)，亦可選用植物來源的培養(yǎng)基。

3、培養(yǎng)基的配制

模擬試驗(yàn)的培養(yǎng)基應(yīng)在適宜區(qū)域進(jìn)行準(zhǔn)備，需注意培養(yǎng)基粉塵在環(huán)境中的擴(kuò)散，以及設(shè)備表面的殘留引發(fā)的微生物滋生。通常按照藥典要求或廠商提供的配制方法配制培養(yǎng)基。配制后的培養(yǎng)基應(yīng)盡快滅菌或除菌過濾。

培養(yǎng)基在模擬試驗(yàn)前應(yīng)恢復(fù)至室溫。即用型無菌液體培養(yǎng)基儲(chǔ)存條件和使用條件可遵循生產(chǎn)商要求。

4、培養(yǎng)基的除菌與滅菌

1）除菌過濾

由于培養(yǎng)基的特性與藥液有差異，培養(yǎng)基除菌過濾的濾器型號(hào)可與產(chǎn)品使用的過濾器不同。如因顆?；蛏镓?fù)載較大等原因引起除菌過濾器的堵塞時(shí)，可增加預(yù)過濾步驟。

需考慮降低非無菌培養(yǎng)基中細(xì)菌和霉菌生長(zhǎng)的風(fēng)險(xiǎn)，以避免微生物生長(zhǎng)導(dǎo)致培養(yǎng)基過濾性能降低。此外除菌過濾的方式無法避免支原體污染，濕熱滅菌或輻照滅菌有助于降低該潛在風(fēng)險(xiǎn)，必要時(shí)可配合除菌過濾聯(lián)合使用。

2）濕熱滅菌

在濕熱滅菌過程中，應(yīng)考慮避免受熱不均勻或滅菌不充分現(xiàn)象，應(yīng)對(duì)該滅菌方式進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和驗(yàn)證，亦可使用無菌干粉或液體成品培養(yǎng)基。

滅菌過程應(yīng)遵循生產(chǎn)商推薦的滅菌時(shí)間和溫度的建議，并對(duì)滅菌過程予以驗(yàn)證。確保滅菌后培養(yǎng)基的促生長(zhǎng)能力，避免過長(zhǎng)時(shí)間及過熱滅菌使培養(yǎng)基碳化造成其促生長(zhǎng)性能的降低，應(yīng)進(jìn)行促生長(zhǎng)能力試驗(yàn)。

3)輻照滅菌

使用輻照滅菌的培養(yǎng)基粉末，在適宜環(huán)境下進(jìn)行配制等操作。輻照滅菌過程應(yīng)經(jīng)驗(yàn)證，并在產(chǎn)品質(zhì)量報(bào)告中體現(xiàn)驗(yàn)證中所用的菌種和劑量等信息。

5、培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力試驗(yàn)

應(yīng)考慮在無菌工藝模擬試驗(yàn)開始前及14天培養(yǎng)后按照現(xiàn)行中國藥典方法對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行促生長(zhǎng)試驗(yàn)。

根據(jù)所選擇的培養(yǎng)基，按照中國藥典要求進(jìn)行促生長(zhǎng)能力試驗(yàn)使用的菌種包括：白色念珠菌（CMCC98001）、黑曲霉（CMCC98003）、枯草芽孢桿菌（CMCC63501）、金黃色葡萄球菌（CMCC26003）、銅綠假單胞菌（CMCC10104）和生孢梭菌（CMCC64941）（必要時(shí)）等。除標(biāo)準(zhǔn)菌株之外，還可考慮加入環(huán)境監(jiān)測(cè)和無菌檢查中發(fā)現(xiàn)的典型微生物。促生長(zhǎng)試驗(yàn)接種量應(yīng)小于100CFU，按照中國藥典要求培養(yǎng)，以證明培養(yǎng)基能夠支持微生物的生長(zhǎng)。

6、其他模擬介質(zhì)的選擇及評(píng)價(jià)

1）其他模擬介質(zhì)的選擇

無菌粉末產(chǎn)品及特殊劑型產(chǎn)品，如懸濁液、軟膏/乳膏/乳液/凝膠等，在無菌工藝模擬試驗(yàn)中會(huì)使用其他模擬介質(zhì)，如安慰劑等。應(yīng)根據(jù)劑型特點(diǎn)、生產(chǎn)工藝及設(shè)備選擇適當(dāng)?shù)哪M介質(zhì)。

模擬介質(zhì)的流動(dòng)性應(yīng)類似于被模擬產(chǎn)品，易于進(jìn)行灌裝/分裝等工藝操作。模擬介質(zhì)還應(yīng)具有易于滅菌，無抑菌性，易溶解等特性。常用模擬介質(zhì)有聚乙二醇、乳糖、甘露醇、氯化鈉、凡士林等。模擬介質(zhì)的滅菌過程應(yīng)經(jīng)驗(yàn)證并提供相關(guān)報(bào)告，其內(nèi)容包括滅菌方式對(duì)模擬介質(zhì)特性有無不良影響，滅菌后的無菌性。模擬介質(zhì)的包裝形式應(yīng)與被模擬物的包裝形式一致或能充分代表該種包裝形式。

2）其他模擬介質(zhì)的評(píng)價(jià)

在使用模擬介質(zhì)前應(yīng)對(duì)其適用性進(jìn)行確認(rèn)，包括無菌試驗(yàn)、抑菌試驗(yàn)、溶解度試驗(yàn)等。抑菌試驗(yàn)通常使用枯草芽孢桿菌（CMCC63501）和白色念珠菌（CMCC98001）。除此之外，還應(yīng)考慮加入環(huán)境和無菌檢查中發(fā)現(xiàn)的典型微生物。無菌模擬介質(zhì)由無菌注射用水分散，然后加入到無菌培養(yǎng)基中，達(dá)到模擬工藝選用的濃度范圍，然后在每份培養(yǎng)基中接種10-100CFU。陽性對(duì)照接種到不含無菌模擬介質(zhì)的試管中，參照現(xiàn)行中國藥典要求，培養(yǎng)7天所有試管應(yīng)明顯渾濁。

無菌工藝模擬灌裝數(shù)量應(yīng)足以保證評(píng)價(jià)的有效性及完成模擬方案中設(shè)計(jì)的各種干預(yù)活動(dòng)。應(yīng)通過風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估對(duì)所設(shè)計(jì)的灌裝數(shù)量、持續(xù)時(shí)間、模擬方式、預(yù)期收率作出合理說明。

生產(chǎn)批量小于5000支，模擬灌裝批量至少與生產(chǎn)批量相同；產(chǎn)品的生產(chǎn)批量在5000支至10000支，模擬灌裝數(shù)量應(yīng)與產(chǎn)品實(shí)際的生產(chǎn)批量相當(dāng)；大規(guī)模生產(chǎn)，即產(chǎn)品的生產(chǎn)批量大于10000支，最低模擬灌裝數(shù)量應(yīng)不得低于10000支；對(duì)于超大批量的生產(chǎn)規(guī)模，例如大于100000支，則應(yīng)考慮適當(dāng)增加模擬的灌裝數(shù)量；如采用密封性生產(chǎn)設(shè)備，可適當(dāng)降低模擬數(shù)量。

容器中培養(yǎng)基灌裝體積應(yīng)考慮適宜微生物生長(zhǎng)的需要和容器內(nèi)表面覆蓋的要求，灌裝體積不必與產(chǎn)品相同，但合適的灌裝量既應(yīng)保證產(chǎn)品通過倒置和旋轉(zhuǎn)接觸到所有內(nèi)表面并有足夠的氧氣支持微生物的生長(zhǎng)，又應(yīng)利于對(duì)培養(yǎng)基的觀察。

在灌裝培養(yǎng)基期間應(yīng)模擬所有類型和規(guī)定數(shù)量的干預(yù)。模擬試驗(yàn)應(yīng)包含生產(chǎn)的初始、結(jié)束階段和干預(yù)發(fā)生的時(shí)刻。大規(guī)模生產(chǎn)時(shí)，模擬試驗(yàn)方法可采用但不限于以下幾種方式：

1、培養(yǎng)基與空瓶切換

模擬試驗(yàn)的持續(xù)時(shí)間和實(shí)際生產(chǎn)相當(dāng)，培養(yǎng)基灌裝數(shù)量少于實(shí)際批量，模擬試驗(yàn)在培養(yǎng)基灌裝和空瓶運(yùn)行間切換。在正常生產(chǎn)條件下應(yīng)模擬灌裝足夠數(shù)量的培養(yǎng)基瓶子，以保證能夠準(zhǔn)確反映實(shí)際生產(chǎn)的污染風(fēng)險(xiǎn)。在不灌裝培養(yǎng)基期間，灌裝線穿插運(yùn)行空容器。該方式能全面評(píng)估人員、操作和生產(chǎn)環(huán)境。

2、培養(yǎng)基與無菌注射用水切換

模擬試驗(yàn)的持續(xù)時(shí)間和實(shí)際生產(chǎn)相當(dāng)，培養(yǎng)基灌裝數(shù)量少于實(shí)際批量，模擬驗(yàn)證在培養(yǎng)基灌裝和注射用水灌裝間切換。此種方式比實(shí)際生產(chǎn)更復(fù)雜，同時(shí)存在注射用水稀釋部分培養(yǎng)基導(dǎo)致促生長(zhǎng)性能下降的風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)通過促生長(zhǎng)試驗(yàn)證明其有效性。

3、培養(yǎng)基灌裝與設(shè)備空轉(zhuǎn)的切換

模擬試驗(yàn)的持續(xù)時(shí)間和實(shí)際生產(chǎn)相當(dāng)，培養(yǎng)基灌裝數(shù)量少于實(shí)際批量，模擬試驗(yàn)在培養(yǎng)基灌裝和設(shè)備空轉(zhuǎn)運(yùn)行間切換。應(yīng)模擬足夠數(shù)量的培養(yǎng)基產(chǎn)品，以保證能夠準(zhǔn)確反映實(shí)際生產(chǎn)的污染風(fēng)險(xiǎn)。在不灌裝培養(yǎng)基期間灌裝線繼續(xù)空轉(zhuǎn)運(yùn)行，模擬正常生產(chǎn)操作狀態(tài)。該方式也能全面評(píng)估人員、操作和生產(chǎn)環(huán)境。

4、生產(chǎn)結(jié)束后模擬

這是在一批產(chǎn)品生產(chǎn)結(jié)束后，直接進(jìn)行培養(yǎng)基灌裝的方式，如果采用該方式應(yīng)注意相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)。此方式因存在局限性，可作為一種補(bǔ)充方式，仍應(yīng)對(duì)設(shè)備組裝、啟動(dòng)和開始灌裝等無菌操作進(jìn)行模擬。對(duì)于可能產(chǎn)生抑菌性影響的情況，不推薦使用本方式。

最差條件并不是指人為創(chuàng)造的超出允許范圍的生產(chǎn)狀況和環(huán)境。為了確認(rèn)無菌工藝風(fēng)險(xiǎn)控制的有效性，應(yīng)通過風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估并結(jié)合無菌生產(chǎn)工藝、設(shè)備裝備水平、人員數(shù)量和干預(yù)等因素來設(shè)計(jì)模擬試驗(yàn)最差條件。包括但不限于以下方面：

1、人員

應(yīng)充分考慮人員及其活動(dòng)對(duì)無菌生產(chǎn)工藝帶來的風(fēng)險(xiǎn)。如模擬生產(chǎn)過程的最多人數(shù)，當(dāng)操作人員數(shù)量減少可能導(dǎo)致其他方面污染風(fēng)險(xiǎn)增加時(shí)，則此類條件也視為最差條件之一。參與人員應(yīng)包括日常參與到無菌生產(chǎn)的全部人員，如生產(chǎn)操作、取樣、環(huán)境監(jiān)測(cè)和設(shè)備設(shè)施維護(hù)人員，同時(shí)應(yīng)考慮以上人員交叉作業(yè)、班次輪換、更衣、夜班疲勞狀態(tài)等因素。

2、時(shí)限

在條件允許的情況下，適當(dāng)考慮模擬實(shí)際生產(chǎn)操作過程中房間、設(shè)備、物料消毒或滅菌后放置的最長(zhǎng)時(shí)間及最長(zhǎng)的工藝保留時(shí)限等，如設(shè)備設(shè)施、分裝容器、無菌器具滅菌后最長(zhǎng)的放置時(shí)間等。

3、灌裝速度

模擬試驗(yàn)應(yīng)涵蓋產(chǎn)品實(shí)際灌裝速度范圍，基于無菌風(fēng)險(xiǎn)的角度分析評(píng)價(jià)灌裝速度對(duì)工藝過程及其他方面的影響程度。例如采用最慢的灌裝速度、最大的容器用以模擬最長(zhǎng)暴露時(shí)間；或采用最快的灌裝速度、最小的容器時(shí)，用以模擬最大操作強(qiáng)度/難度。

4、環(huán)境

無菌工藝模擬試驗(yàn)期間環(huán)境的消毒處理應(yīng)依據(jù)正常生產(chǎn)期間的消毒方法進(jìn)行，避免過度消毒及消毒劑的過度使用。

1、概念

干預(yù)是指由操作人員按照相關(guān)規(guī)定參與無菌工藝生產(chǎn)的所有操作活動(dòng)。干預(yù)可分為固有干預(yù)和糾正性干預(yù)。固有干預(yù)是指常規(guī)和有計(jì)劃的無菌操作，如裝載膠塞，環(huán)境監(jiān)控，設(shè)備安裝等；糾正性干預(yù)是指對(duì)無菌生產(chǎn)過程的糾正或調(diào)整，如生產(chǎn)過程中清除破碎的瓶子，排除卡住的膠塞，更換部件、設(shè)備故障排除等。

2、原則

應(yīng)對(duì)無菌生產(chǎn)過程中各種允許的干預(yù)活動(dòng)進(jìn)行文件化管理，明確規(guī)定正常生產(chǎn)中允許的干預(yù)活動(dòng)。模擬試驗(yàn)中干預(yù)設(shè)計(jì)應(yīng)與實(shí)際的生產(chǎn)活動(dòng)保持一致，模擬試驗(yàn)不應(yīng)挑戰(zhàn)不合理的干預(yù)，以證明其合理性。在模擬試驗(yàn)方案中應(yīng)制定干預(yù)清單和實(shí)施計(jì)劃，模擬試驗(yàn)時(shí)逐一實(shí)施并記錄。

3、模擬類型及頻次

無菌模擬試驗(yàn)方案中應(yīng)明確規(guī)定固有干預(yù)、糾正性干預(yù)的頻次、類型及復(fù)雜程度（如簡(jiǎn)單干預(yù)：倒瓶剔除等；復(fù)雜干預(yù)：灌裝機(jī)泵及針頭裝配、設(shè)備故障維修等）。

固有干預(yù)及經(jīng)常發(fā)生的糾正性干預(yù)一般應(yīng)在每次模擬中都實(shí)施，偶發(fā)性的干預(yù)可周期性地模擬，如無菌生產(chǎn)過程意外暫?；蛑貑?、無菌狀態(tài)下設(shè)備、設(shè)施偶發(fā)故障排除等。

模擬試驗(yàn)應(yīng)設(shè)計(jì)并實(shí)施足夠數(shù)量的糾正性干預(yù)。干預(yù)頻次的設(shè)計(jì)應(yīng)考慮實(shí)際生產(chǎn)情況，按比例覆蓋模擬試驗(yàn)的全過程。

對(duì)于無菌取樣、調(diào)整裝量過程，均應(yīng)考慮在分裝的前、中、后階段進(jìn)行。

4、人員

實(shí)施干預(yù)的人員（應(yīng)包括操作、維修人員等）應(yīng)經(jīng)過相關(guān)的培訓(xùn)和考核，并能按規(guī)定的程序?qū)嵤└鞣N干預(yù)。標(biāo)準(zhǔn)化的、簡(jiǎn)單的固有干預(yù)可由部分操作人員實(shí)施并據(jù)此評(píng)價(jià)其他人。對(duì)于復(fù)雜操作，如裝配灌裝機(jī)等，每個(gè)從事該操作的人員都應(yīng)在驗(yàn)證過程中模擬，操作條件不應(yīng)優(yōu)于日常生產(chǎn)的操作條件。

5、干預(yù)后產(chǎn)品（容器）的處理

實(shí)際工藝中如明確規(guī)定受干預(yù)影響的產(chǎn)品（容器）應(yīng)從生產(chǎn)線上剔除，在模擬試驗(yàn)時(shí)也可剔除。模擬試驗(yàn)時(shí)產(chǎn)生的這類產(chǎn)品（容器）可不培養(yǎng)，但不培養(yǎng)的容器應(yīng)予以記錄并評(píng)估其合理性。如在干預(yù)發(fā)生前已經(jīng)密封，在日常生產(chǎn)中按規(guī)定不需要剔除的產(chǎn)品，模擬試驗(yàn)時(shí)也應(yīng)保留、培養(yǎng)并納入評(píng)估。

6、記錄

模擬試驗(yàn)過程中的所有干預(yù)必須記錄。糾正性干預(yù)記錄的內(nèi)容至少應(yīng)包括糾正性干預(yù)的類型、位置、次數(shù)；固有干預(yù)記錄至少包括干預(yù)內(nèi)容和發(fā)生頻率。

一條灌裝線上有多種規(guī)格容器時(shí)，應(yīng)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估選擇模擬的容器。一般選擇最小和/或最大尺寸的容器進(jìn)行培養(yǎng)基灌裝模擬試驗(yàn)。通常采用無色透明的容器代替不透明或棕色的容器。

1、培養(yǎng)前的容器檢查

模擬試驗(yàn)中密封缺陷產(chǎn)品的剔除工藝應(yīng)采用日常生產(chǎn)的剔除工藝。除密封缺陷的產(chǎn)品外，其他外觀缺陷、灌裝量異常的模擬產(chǎn)品也應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)。

2、培養(yǎng)條件

在培養(yǎng)前，一般應(yīng)對(duì)模擬灌裝產(chǎn)品進(jìn)行顛倒、輕搖以使培養(yǎng)基接觸所有內(nèi)表面，或倒置培養(yǎng)培養(yǎng)時(shí)間至少14天，可選擇兩個(gè)溫度進(jìn)行培養(yǎng)：在20℃—25℃培養(yǎng)至少7天，然后在30℃—35℃培養(yǎng)至少7天。如選擇其他培養(yǎng)計(jì)劃，應(yīng)有試驗(yàn)數(shù)據(jù)支持所選培養(yǎng)條件的適用性。在整個(gè)培養(yǎng)期間應(yīng)連續(xù)監(jiān)控培養(yǎng)溫度。

如實(shí)際生產(chǎn)過程中，分裝容器內(nèi)需要填充惰性氣體，在模擬試驗(yàn)過程應(yīng)考慮用無菌空氣替代。替代無菌空氣應(yīng)通過與惰性氣體相同的管道系統(tǒng)以確保完全模擬惰性氣體的使用過程。如必須采用惰性氣體用以模擬厭氧無菌工藝（氧氣濃度低于0.1%）及培養(yǎng)厭氧微生物，應(yīng)確認(rèn)惰性氣體與培養(yǎng)基的組合是否支持相應(yīng)微生物的生長(zhǎng)。

3、培養(yǎng)后的檢查

培養(yǎng)結(jié)束后，應(yīng)對(duì)所有模擬灌裝產(chǎn)品逐支進(jìn)行無菌性檢查，通常應(yīng)在合適的照度下進(jìn)行目視觀察。

在培養(yǎng)期間，應(yīng)定期觀察培養(yǎng)基的培養(yǎng)情況，如在培養(yǎng)期間發(fā)現(xiàn)異常情況時(shí)應(yīng)做進(jìn)一步調(diào)查。

如在培養(yǎng)后檢查中發(fā)現(xiàn)密封缺陷的灌裝產(chǎn)品，應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)脑蛘{(diào)查并采取糾正措施。

當(dāng)灌裝不透明的容器，應(yīng)考慮將轉(zhuǎn)移至透明容器觀察的可能性，以確保陽性容器的發(fā)現(xiàn)。

為保證模擬試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，應(yīng)對(duì)各個(gè)階段的模擬灌裝產(chǎn)品進(jìn)行準(zhǔn)確計(jì)數(shù)：包括灌裝、培養(yǎng)前檢查、培養(yǎng)后檢查的數(shù)量等。數(shù)量應(yīng)平衡，如發(fā)現(xiàn)不平衡，應(yīng)調(diào)查原因并判斷本次模擬試驗(yàn)是否有效。

1、環(huán)境監(jiān)控方案設(shè)計(jì)

應(yīng)通過風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估確定日常生產(chǎn)環(huán)境監(jiān)控的各要素，如取樣點(diǎn)、取樣對(duì)象、取樣頻率、警戒和糾偏標(biāo)準(zhǔn)、實(shí)施方法等。

模擬試驗(yàn)時(shí)應(yīng)以日常生產(chǎn)的環(huán)境監(jiān)控方案為基礎(chǔ)，模擬生產(chǎn)狀況，包括采樣儀器、耗材的轉(zhuǎn)移、消毒等，任何異于日常環(huán)境監(jiān)控的情況都應(yīng)有說明和記錄。

與實(shí)際生產(chǎn)工藝相比，模擬試驗(yàn)中的環(huán)境監(jiān)控應(yīng)考慮增加額外的監(jiān)測(cè)環(huán)節(jié)，如人員監(jiān)測(cè)。

2、環(huán)境監(jiān)控?cái)?shù)據(jù)處理

環(huán)境（包括人員）監(jiān)控的數(shù)據(jù)結(jié)果用于評(píng)估模擬生產(chǎn)過程中的環(huán)境條件是否適宜于生產(chǎn)。當(dāng)模擬試驗(yàn)出現(xiàn)陽性結(jié)果時(shí)，環(huán)境監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)可用于進(jìn)行根本原因的調(diào)查。

模擬試驗(yàn)時(shí)發(fā)生的環(huán)境偏差并不是模擬試驗(yàn)成功的否決條件，是否通過試驗(yàn)取決于調(diào)查的結(jié)果。環(huán)境監(jiān)測(cè)結(jié)果異常時(shí)，即使試驗(yàn)結(jié)果成功，也應(yīng)進(jìn)行必要的調(diào)查和糾正。即使最終決定在環(huán)境監(jiān)控結(jié)果超出糾偏標(biāo)準(zhǔn)時(shí)無菌工藝模擬試驗(yàn)依然通過，也不意味著日常生產(chǎn)可以在同等環(huán)境偏差的條件下進(jìn)行。

所有被授權(quán)在生產(chǎn)時(shí)進(jìn)入無菌灌裝間的人員，包括操作人員、觀察人員和維修人員等，每年至少參加一次成功的無菌工藝模擬試驗(yàn)。

模擬試驗(yàn)方案的設(shè)計(jì)、實(shí)施及微生物污染調(diào)查應(yīng)有具備微生物方面專業(yè)知識(shí)的人員參與。

1、凍干制劑

1）凍干過程的進(jìn)箱、凍干、出箱操作是凍干制劑無菌工藝一部分，因此應(yīng)在無菌工藝模擬試驗(yàn)中模擬產(chǎn)品的凍干操作過程。冷凍可能使培養(yǎng)基捕獲的微生物受損，影響其生長(zhǎng)，因此方案設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)給予考慮和評(píng)估。如影響明顯，則不推薦模擬冷凍過程。模擬凍干時(shí)，必須考慮真空度、維持時(shí)間及溫度。一定溫度下的真空度會(huì)使培養(yǎng)基沸騰，應(yīng)避免這種情況的發(fā)生。

2）模擬凍干操作過程有以下兩種模式，企業(yè)應(yīng)基于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估設(shè)計(jì)模擬的方式。

即培養(yǎng)基灌裝到容器中，半壓塞，將容器轉(zhuǎn)移至凍干機(jī)內(nèi)，在凍干機(jī)箱體內(nèi)部分抽真空，維持真空狀態(tài)的時(shí)間短于實(shí)際凍干周期，然后箱體破空（可依據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)計(jì)破空次數(shù)），在凍干機(jī)內(nèi)完全壓塞。應(yīng)當(dāng)有預(yù)防性措施確保培養(yǎng)基保持在有氧狀態(tài)以免阻礙微生物生長(zhǎng)的情況發(fā)生。

此模式關(guān)注了風(fēng)險(xiǎn)最大的裝載和壓塞操作，但模擬凍干的時(shí)間較短，可能導(dǎo)致污染風(fēng)險(xiǎn)低于正常生產(chǎn)。

即培養(yǎng)基灌裝到容器中，半壓塞，將容器轉(zhuǎn)移至凍干機(jī)內(nèi)，模擬正常的生產(chǎn)的凍干時(shí)間，在凍干機(jī)箱體內(nèi)全部或部分抽真空，箱體破空，在凍干機(jī)內(nèi)完全壓塞，轉(zhuǎn)移至下道工序密封。

此種模式為全程模擬，和實(shí)際生產(chǎn)一致。但應(yīng)關(guān)注長(zhǎng)時(shí)間真空可能導(dǎo)致培養(yǎng)基水分揮發(fā)過度，可能降低微生物回收率，且較為費(fèi)時(shí)。

3）應(yīng)基于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估設(shè)計(jì)模擬試驗(yàn)時(shí)培養(yǎng)基在凍干機(jī)內(nèi)放置的位置。

4)抽真空后，通常應(yīng)采用無菌空氣代替惰性氣體平衡腔室壓力，以利于TSB培養(yǎng)基支持微生物的生長(zhǎng)。

2、懸濁液

懸濁液用于不溶性無菌產(chǎn)品，如一些抗生素、疫苗和皮質(zhì)激素。懸濁液模擬應(yīng)包含懸濁液使用的工藝及相應(yīng)的無菌操作。其他具有特殊工藝的懸濁液，模擬程序應(yīng)該考慮其特殊性。

模擬程序應(yīng)該包括懸濁液生產(chǎn)的特征步驟，如安慰劑的滅菌，無菌粉末的加入和懸濁液的混合等。與液體制劑模擬差別最大之處在于無菌條件下，將無菌模擬介質(zhì)粉末加入到液體制劑過程。

懸濁液的無菌操作與溶液制劑的無菌操作方法類似，但由于懸濁液劑型配制的步驟，會(huì)相應(yīng)增加攪拌器、緩沖罐、管路以及相應(yīng)的無菌操作等特別之處。上述步驟均應(yīng)在模擬試驗(yàn)中體現(xiàn)。

3、軟膏/乳膏/乳液/凝膠

無菌軟膏/乳膏/乳液/凝膠與溶液或懸濁液產(chǎn)品無菌工藝模擬試驗(yàn)類似。模擬過程應(yīng)涵蓋實(shí)際操作的工藝。盡量采用被模擬產(chǎn)品的工藝和無菌操作方式?？稍黾釉龀韯┑饶M介質(zhì)使其更接近被模擬產(chǎn)品特性。

無菌軟膏的模擬通常不同于西林瓶或安瓿瓶的設(shè)備上進(jìn)行。模擬的基本方法是類似于其他劑型的。

對(duì)于軟膏/乳膏/乳液/凝膠產(chǎn)品的模擬特點(diǎn)在于容器的檢查時(shí)，模擬介質(zhì)的轉(zhuǎn)出觀察需要特別注意。

4、粉末制劑（無菌粉末分裝）

1）無菌產(chǎn)品配方中加入其他無菌物質(zhì)的過程應(yīng)被模擬，例如混合、研磨、分裝以及其他工序。

2）粉末灌裝設(shè)備與液體灌裝設(shè)備差異很大，模擬時(shí)常包含液體和/或粉末兩種無菌工藝操作。

3）陰性對(duì)照

如粉末模擬試驗(yàn)用到無菌液體和無菌模擬介質(zhì)粉末兩種工藝操作，可采用單獨(dú)模擬一些液體容器作為陰性對(duì)照。

粉末無菌工藝模擬試驗(yàn)中模擬介質(zhì)的模擬可能引起塵埃粒子檢測(cè)數(shù)據(jù)超標(biāo)，可參考實(shí)際生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)，記錄與分析粒子粒徑，分析粉末灌裝時(shí)是否會(huì)引起塵埃粒子監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)浮動(dòng)。

5、其他劑型

其他一些不常見的劑型，如吸入劑、氣霧劑和植入劑等，可參考本指南提供的設(shè)計(jì)理念，以滿足這些劑型的具體要求。

應(yīng)依據(jù)方案，建立詳細(xì)的用于實(shí)施模擬試驗(yàn)的批記錄。批記錄的格式應(yīng)與產(chǎn)品的批生產(chǎn)記錄格式相同，包括所有與試驗(yàn)相關(guān)信息和操作人員確認(rèn)簽字及原始記錄等。方案及批記錄應(yīng)得到質(zhì)量管理部門的批準(zhǔn)，驗(yàn)證實(shí)施過程除了嚴(yán)格按照方案及批記錄的要求執(zhí)行外，還應(yīng)關(guān)注以下幾方面的因素：

1、產(chǎn)品容器、膠塞、接觸產(chǎn)品的設(shè)備和部件應(yīng)按SOP準(zhǔn)備。

2、為了便于偏差調(diào)查，可對(duì)完成密封后的模擬產(chǎn)品包裝單元進(jìn)行編號(hào)，每一組編號(hào)用于追溯到無菌工藝模擬試驗(yàn)的時(shí)間及相應(yīng)的操作。

應(yīng)對(duì)無菌工藝模擬試驗(yàn)過程進(jìn)行相應(yīng)的過程監(jiān)控，確保過程符合方案和批記錄的要求。應(yīng)詳細(xì)準(zhǔn)確記錄模擬試驗(yàn)中實(shí)施的各種干預(yù)，可采取觀察或錄像（電子采集）等技術(shù)對(duì)模擬生產(chǎn)的關(guān)鍵過程進(jìn)行詳細(xì)記錄。

3、無菌工藝模擬結(jié)束，應(yīng)對(duì)與模擬介質(zhì)接觸的設(shè)備、容器、部件等進(jìn)行有效清潔，防止模擬介質(zhì)殘留造成微生物滋生。

4、模擬試驗(yàn)的結(jié)果、評(píng)估和結(jié)論應(yīng)形成書面報(bào)告并經(jīng)質(zhì)量管理部門批準(zhǔn)。根據(jù)實(shí)施記錄，為通過模擬驗(yàn)證的人員頒發(fā)確認(rèn)書并規(guī)定有效期限。