在染色體畸變實驗（即協(xié)和華美開設的“MMC+SCGE實驗”）中，將患者的血液標本培養(yǎng)于含有刺激淋巴細胞分裂的化學物質(zhì)（如植物凝集素）的外周血培養(yǎng)基中；培養(yǎng)的同時加入誘導DNA交聯(lián)的化學制劑，如絲裂霉素C（MMC）和/或二環(huán)氧丁烷（DEB）處理培養(yǎng)物；評估細胞中的斷裂染色體和重排染色體。

正常細胞可以糾正由DNA交聯(lián)劑引起的大部分染色體損傷，而來自FA患者的細胞通常顯示繁多的染色體斷裂和染色體重排。

△ 圖2 染色體畸變實驗陰陽性對比圖

畸變?nèi)旧w通?？梢苑譃?大類

1、斷裂染色體

斷裂染色體包含染色體臂出現(xiàn)斷裂間隙和染色體臂斷裂兩類，此類畸變計1次“斷裂事件”。

2、三射體染色體

2個不同染色體發(fā)生斷裂后，錯誤修復形成的染色體，此類畸變計2次“斷裂事件”。

3、四射體染色體

2個不同染色體發(fā)生斷裂后，錯誤修復形成的染色體，此類畸變計2次“斷裂事件”。（畸變后鏡下狀態(tài)與三射體區(qū)分見下圖）

4、復雜染色體

多個染色體、多次斷裂、多次斷裂修復形成的復雜染色體，此類畸變原則上采用“參與復雜染色體形成的染色體數(shù)目”+“斷裂點數(shù)目”=“總斷裂事件數(shù)”公式，進行“斷裂事件”計數(shù)。

△ 圖3 畸變?nèi)旧w舉例

對患者的染色體分裂相進行“斷裂事件”計數(shù)，一個分裂相中“斷裂事件”總數(shù)超過10的，計10（這是為了防止個別嚴重畸變的分裂相對總體分值的影響過高導致判讀錯誤）。

根據(jù)積分結(jié)果可將患者分為三類：

1、FA陽性

此類患者每個染色體分裂相均可表現(xiàn)出不同程度的染色體畸變，通常在300nM的 MMC藥物作用下，絕大多數(shù)分裂相的“斷裂事件”都會超過10

2、FA陰性

在300nM的 MMC藥物作用下，患者幾乎沒有 “斷裂事件”積分超過10的分裂相，大多數(shù)是0-3個“斷裂事件”。

3、FA-mosaic

這是一種FA嵌合體患者，患者染色體分裂相表現(xiàn)出兩種群類，第一群類與FA陽性患者表現(xiàn)一致，即分裂相“斷裂事件”通常超過10，第二群類與FA陰性患者表現(xiàn)一致，即分裂相“斷裂事件”積分通常為0-3。

△ 圖4 實驗結(jié)果判讀指示圖

目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)至少16種基因突變與FA的發(fā)生密切相關，這16種基因是FANCA, FANCB, FANCC, FANCD1 (BRCA2), FANCD2, FANCE, FANCF, FANCG, FANCI, FANCJ (BRIP1), FANCL, FANCM, FANCN (PALB2), FANCO, FANCP (SLX4), FANCQ (XPF/ERCC4)，與之對應的FA分型分別是FA-A,-B,-C,-D1,-D2,-E,-F,-G,-I,-J,-L ,-M,-N,-O,-P和-Q。

這些基因的詳細信息如圖5 ?

△ 圖5 FA相關基因的基本信息

除FANCB基因位于X染色體外，其他基因都位于常染色體，F(xiàn)ANCB之外的FA突變基因的遺傳規(guī)律遵循下圖：

△ 圖6 FA突變基因遺傳規(guī)律

如果患者染色體畸變實驗呈陽性，則應進行二代測序突變分析以確定導致患者發(fā)展為FA的特定基因突變。

確定致病突變基因的必要性表現(xiàn)在以下幾個方面：

1、能夠?qū)易宄蓡T進行突變特異性檢測，并且可以準確診斷只有一個FA基因突變拷貝的個體（例如FA患者的父母），這些個體通常沒有FA的臨床表現(xiàn)；以及對具有兩個FA基因突變拷貝（例如患者）的個體進行診斷。這些信息可以為遺傳咨詢提供幫助。

2、可用于婚前篩查，產(chǎn)前診斷。

3、有助于準確分析潛在骨髓捐獻者的基因型，例如捐獻者沒有任何FA的癥狀，但他可能是FA患者的直系親屬，任何攜帶FA突變基因的個體都不會被用作捐獻者。

4、可以對臨床癥狀較輕的FA患者進行密切監(jiān)測，幫助預測其發(fā)展為再生障礙性貧血，骨髓增生異常綜合征，白血病或?qū)嶓w瘤的潛在風險。

5、可以為基因治療和未來藥物的發(fā)展提供關鍵信息。