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營養(yǎng)缺陷型突變株的篩選 1) 與營養(yǎng)缺陷突變有關(guān)的三類遺傳型個(gè)體 ① 營養(yǎng)缺陷型——原菌株由于發(fā)生基因突變，致使合成途徑中某一步驟發(fā)生缺陷，喪失了合成某種代謝產(chǎn)物的能力，必須在培養(yǎng)基中外源補(bǔ)加該物質(zhì)才能生長，這類突變菌株，謂營養(yǎng)缺陷型突變株，簡稱營養(yǎng)缺陷型。 ② 野生型)——變異前的原始菌株。 ③ 原養(yǎng)型——營養(yǎng)缺陷型菌株經(jīng)回復(fù)突變或重組后產(chǎn)生的菌株，其營養(yǎng)要求在表型上與野生型相同，表示方法亦同野生型。 2) 與篩選營養(yǎng)缺陷型有關(guān)的三類培養(yǎng)基 ① 基本培養(yǎng)基——能滿足某一菌種的野生型或原養(yǎng)型菌株?duì)I養(yǎng)要求的最低成分的合成培養(yǎng)基。 ② 補(bǔ)充培養(yǎng)基——在基本培養(yǎng)基中有針對性地補(bǔ)加某一種或幾種營養(yǎng)成分，以滿足相應(yīng)的營養(yǎng)缺陷型菌株生長需要(其他營養(yǎng)缺陷型仍不能生長)的培養(yǎng)基。 ③ 完全培養(yǎng)基——可滿足該菌各種營養(yǎng)缺陷型菌株?duì)I養(yǎng)需要的天然或半合成培養(yǎng)基。 3) 篩選營養(yǎng)缺陷型菌株的一般步驟和方法 ① 誘變常用紫外線誘變形成大量營養(yǎng)缺陷型菌株。 ② 淘汰野生型 a) 抗生素法 某些抗生素能殺死生長繁殖著的微生物，而對處于休止?fàn)顟B(tài)的微生物無殺傷作用。如青霉素能抑制細(xì)菌細(xì)胞壁肽聚糖的生物合成。 b) 菌絲過濾法適用于放線菌、霉菌等絲狀微生物。在基本培養(yǎng)基中野生型孢子能萌發(fā)長成菌絲體，而營養(yǎng)缺陷型孢子則不生長。將經(jīng)誘變處理的孢子接種于液態(tài)基本培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)lOh—12h，使原養(yǎng)型萌發(fā)(以肉眼剛能看見菌絲為度)，然后以濾紙、棉花或玻璃過濾漏斗過濾，菌絲被濾除，未萌發(fā)的缺陷型孢子能順利通過，從而達(dá)到富集營養(yǎng)缺陷型的目的。 ③ 檢出缺陷型的常用方法 a) 逐個(gè)測定法(點(diǎn)種法) 把經(jīng)誘變處理并淘汰野生型后的菌液在完全培養(yǎng)基上涂布 分離，將培養(yǎng)后長出的每一個(gè)菌落分別點(diǎn)種在基本培養(yǎng)基和另一個(gè)完全培養(yǎng)基上，凡在基本培養(yǎng)基上不能生長而在完全培養(yǎng)基的相應(yīng)位置上能生長的菌落，表明其為營養(yǎng)缺陷型。 b) 夾層培養(yǎng)法經(jīng)誘變處理后的菌液，稀釋后與基本培養(yǎng)基混勻并傾入平皿中，待凝固后，再加上一薄層不含菌的基本培養(yǎng)基。培養(yǎng)后在皿底將長出的菌落做上標(biāo)記。然后加上一層完全培養(yǎng)基，再經(jīng)培養(yǎng)后，新出現(xiàn)的菌落多數(shù)是營養(yǎng)缺陷型。此法適用于兼性厭氧的細(xì)菌。 c) 影印法將絲絨包在直徑小于平皿的圓柱臺上，固定，作為影印接種工具，滅菌備用。將經(jīng)誘變處理并淘汰野生型的菌液涂布于完全培養(yǎng)基表面上，培養(yǎng)，待長出菌落后，用影印接種工具在此平板上輕按一下，然后在另一基本培養(yǎng)基平板上按一下。經(jīng)培養(yǎng)后在基本培養(yǎng)基上不長而在完全培養(yǎng)基的相應(yīng)部位上生長的菌落，為營養(yǎng)缺陷型 。 由資料的3)② 知：野生型孢子能在加青霉素的基本培養(yǎng)基上萌發(fā)而被青霉素殺死，營養(yǎng)缺陷型孢子不能在加青霉素的基本培養(yǎng)基上萌發(fā)而不被青霉素殺死，因此營養(yǎng)缺陷型孢子得以在加青霉素的基本培養(yǎng)基中保留。 |
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